[發(fā)明專利]一種杠柳次苷的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010583339.0
• 申請(qǐng)日: 2010-12-13
• 公開（公告）號(hào): CN102154417A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘桂湘;劉虹;王怡;高秀梅;劉二偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P19/56
• 分類號(hào): C12P19/56
• 代理公司: 北京市惠誠(chéng)律師事務(wù)所 11353
• 代理人: 雷志剛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種杠柳次苷的制備方法，還涉及一種包含杠柳次苷的提取物及其組合物。

背景技術(shù)

中藥香加皮(Cortex?Periplocae)又名北五加皮，是蘿藦科植物杠柳(Periploca?sepium?Punge)的干燥根皮，因其含有強(qiáng)心苷成分，近年來(lái)常用于治療急、慢性充血性心力衰竭。目前對(duì)于香加皮強(qiáng)心苷類的研究，由于杠柳毒苷(Periplocin，C₃₆H₅₆O₁₃)在香加皮藥材中含量較高，制備單體化合物相對(duì)容易，故關(guān)注杠柳毒苷較多，而對(duì)杠柳次苷關(guān)注較少。

杠柳毒苷結(jié)構(gòu)為杠柳苷元-(D-加拿大麻糖)-(D-葡萄糖)。杠柳次苷(periplocymarin，C₃₀H₄₆O₈)結(jié)構(gòu)為杠柳苷元-(D-加拿大麻糖)，是由杠柳毒苷脫去一分子葡萄糖而生成的次生甲型強(qiáng)心苷。通常甲型強(qiáng)心苷及其苷元的活性/毒性存在如下規(guī)律：苷元＜單糖苷＞二糖苷＞三糖苷[肖崇厚.中藥化學(xué).上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社.1997：341]。杠柳次苷為單糖苷，其活性/毒性之所以大于杠柳苷元，是由于其對(duì)心肌細(xì)胞膜上類脂質(zhì)的親和力大于苷元；而杠柳毒苷(二糖苷)的活性/毒性之所以小于杠柳次苷，是由于隨著這些分子中糖基數(shù)目的增加，水溶性增大，親脂性降低，與心肌細(xì)胞膜上類脂質(zhì)的親和力減弱，強(qiáng)心作用減小。文獻(xiàn)報(bào)道[李章文.杠柳皮(北五加皮)的強(qiáng)心作用.中華醫(yī)學(xué)雜志.1956，7：651]杠柳次苷具有比杠柳毒苷強(qiáng)心作用更快、持續(xù)時(shí)間更短、蓄積作用更小等特點(diǎn)。另外，研究發(fā)現(xiàn)杠柳毒苷與大鼠、人體的腸菌溫孵，會(huì)迅速代謝生成杠柳次苷[任曉亮，謝躍生，潘桂湘，等.香加皮強(qiáng)心成分杠柳毒苷腸菌代謝研究.天津中醫(yī)藥，2007，24(6)：515.]；大鼠口服杠柳毒苷，糞便中也主要以杠柳次苷的形式排泄[王強(qiáng)，任曉亮，王焱，等.杠柳毒苷在大鼠體內(nèi)排泄的初步研究.天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，27(1)：29]。因此，杠柳次苷也應(yīng)是香加皮起強(qiáng)心作用的主要成分之一。對(duì)杠柳次苷進(jìn)行制備，有利于明確中藥香加皮強(qiáng)心物質(zhì)基礎(chǔ)的研究，以及利于該中藥的進(jìn)一步開發(fā)。

默克索引(14版，第1239頁(yè))提到過(guò)杠柳次苷的酶解制備方法：用70％乙醇提取希臘杠柳，然后用源自Strophanthus?courmonti?Saclcux，Apocynaceae種子的毒毛旋花子雙糖酶(enzyme?strophanthobiase)處理，然而其中并未提及杠柳毒苷酶解的具體工藝以及工藝效果例如杠柳次苷的收率、純度等。

因此提供一種穩(wěn)定、可靠、低毒、和/或可用于工業(yè)化生產(chǎn)的制備杠柳次苷的方法，獲得高純度的杠柳次苷，以供新藥研發(fā)或科學(xué)研究，仍是本領(lǐng)域技術(shù)人員急于解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有制備杠柳次苷技術(shù)中存在的不足，提供一種穩(wěn)定、可靠、低毒、和/或可用于工業(yè)化生產(chǎn)的、制備高純度杠柳次苷的方法。本發(fā)明令人意外地發(fā)現(xiàn)，通過(guò)將含有杠柳毒苷的底物用蝸牛酶進(jìn)行酶解，接著進(jìn)行柱層析和重結(jié)晶，可以以高的純度和/或產(chǎn)率獲得杠柳次苷。本發(fā)明基于以上發(fā)現(xiàn)而得以完成。

發(fā)明概述：

為此，本發(fā)明第一方面提供了一種制備杠柳次苷的方法，其包括以下步驟：

(1)使含有杠柳毒苷的底物與蝸牛酶混合，進(jìn)行酶解反應(yīng)，得到酶解粗提物；

(2)使所述酶解粗提物進(jìn)行色譜層析，得到精制提取物；

(3)使所述精制提取物從甲醇和水的混合物中重結(jié)晶，得到杠柳次苷。

本發(fā)明第二方面提供了一種包含杠柳次苷的提取物，其中以重量百分?jǐn)?shù)計(jì)包含80％以上(或者優(yōu)選85％以上，優(yōu)選90％以上)的杠柳次苷。

本發(fā)明第三方面提供了一種組合物，包含杠柳次苷或者本發(fā)明第二方面任一項(xiàng)所述的提取物，并且其中基本上不合杠柳毒苷。

發(fā)明詳述：

本發(fā)明第一方面提供了一種制備杠柳次苷的方法，其包括以下步驟：

(1)使含有杠柳毒苷的底物與蝸牛酶混合，進(jìn)行酶解反應(yīng)，得到酶解粗提物；

(2)使所述酶解粗提物進(jìn)行色譜層析，得到精制提取物；

(3)使所述精制提取物從甲醇和水的混合物中重結(jié)晶，得到杠柳次苷。

在本發(fā)明第一方面所述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，其中所述底物可以是杠柳毒苷單體、含有杠柳毒苷的香加皮提取物、含有杠柳毒苷的香加皮藥材、或其組合。