[發明專利]一種杠柳次苷的制備方法

無效

• 申請號: 201010583339.0
• 申請日: 2010-12-13
• 公開（公告）號: CN102154417A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 潘桂湘;劉虹;王怡;高秀梅;劉二偉
• 申請（專利權）人: 天津中醫藥大學
• 主分類號: C12P19/56
• 分類號: C12P19/56
• 代理公司: 北京市惠誠律師事務所 11353
• 代理人: 雷志剛

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種杠柳次苷的制備方法，還涉及一種包含杠柳次苷的提取物及其組合物。

背景技術

中藥香加皮(Cortex?Periplocae)又名北五加皮，是蘿藦科植物杠柳(Periploca?sepium?Punge)的干燥根皮，因其含有強心苷成分，近年來常用于治療急、慢性充血性心力衰竭。目前對于香加皮強心苷類的研究，由于杠柳毒苷(Periplocin，C₃₆H₅₆O₁₃)在香加皮藥材中含量較高，制備單體化合物相對容易，故關注杠柳毒苷較多，而對杠柳次苷關注較少。

杠柳毒苷結構為杠柳苷元-(D-加拿大麻糖)-(D-葡萄糖)。杠柳次苷(periplocymarin，C₃₀H₄₆O₈)結構為杠柳苷元-(D-加拿大麻糖)，是由杠柳毒苷脫去一分子葡萄糖而生成的次生甲型強心苷。通常甲型強心苷及其苷元的活性/毒性存在如下規律：苷元＜單糖苷＞二糖苷＞三糖苷[肖崇厚.中藥化學.上海：上海科學技術出版社.1997：341]。杠柳次苷為單糖苷，其活性/毒性之所以大于杠柳苷元，是由于其對心肌細胞膜上類脂質的親和力大于苷元；而杠柳毒苷(二糖苷)的活性/毒性之所以小于杠柳次苷，是由于隨著這些分子中糖基數目的增加，水溶性增大，親脂性降低，與心肌細胞膜上類脂質的親和力減弱，強心作用減小。文獻報道[李章文.杠柳皮(北五加皮)的強心作用.中華醫學雜志.1956，7：651]杠柳次苷具有比杠柳毒苷強心作用更快、持續時間更短、蓄積作用更小等特點。另外，研究發現杠柳毒苷與大鼠、人體的腸菌溫孵，會迅速代謝生成杠柳次苷[任曉亮，謝躍生，潘桂湘，等.香加皮強心成分杠柳毒苷腸菌代謝研究.天津中醫藥，2007，24(6)：515.]；大鼠口服杠柳毒苷，糞便中也主要以杠柳次苷的形式排泄[王強，任曉亮，王焱，等.杠柳毒苷在大鼠體內排泄的初步研究.天津中醫藥大學學報，2008，27(1)：29]。因此，杠柳次苷也應是香加皮起強心作用的主要成分之一。對杠柳次苷進行制備，有利于明確中藥香加皮強心物質基礎的研究，以及利于該中藥的進一步開發。

默克索引(14版，第1239頁)提到過杠柳次苷的酶解制備方法：用70％乙醇提取希臘杠柳，然后用源自Strophanthus?courmonti?Saclcux，Apocynaceae種子的毒毛旋花子雙糖酶(enzyme?strophanthobiase)處理，然而其中并未提及杠柳毒苷酶解的具體工藝以及工藝效果例如杠柳次苷的收率、純度等。

因此提供一種穩定、可靠、低毒、和/或可用于工業化生產的制備杠柳次苷的方法，獲得高純度的杠柳次苷，以供新藥研發或科學研究，仍是本領域技術人員急于解決的問題。

發明內容

本發明的目的是克服現有制備杠柳次苷技術中存在的不足，提供一種穩定、可靠、低毒、和/或可用于工業化生產的、制備高純度杠柳次苷的方法。本發明令人意外地發現，通過將含有杠柳毒苷的底物用蝸牛酶進行酶解，接著進行柱層析和重結晶，可以以高的純度和/或產率獲得杠柳次苷。本發明基于以上發現而得以完成。

發明概述：

為此，本發明第一方面提供了一種制備杠柳次苷的方法，其包括以下步驟：

(1)使含有杠柳毒苷的底物與蝸牛酶混合，進行酶解反應，得到酶解粗提物；

(2)使所述酶解粗提物進行色譜層析，得到精制提取物；

(3)使所述精制提取物從甲醇和水的混合物中重結晶，得到杠柳次苷。

本發明第二方面提供了一種包含杠柳次苷的提取物，其中以重量百分數計包含80％以上(或者優選85％以上，優選90％以上)的杠柳次苷。

本發明第三方面提供了一種組合物，包含杠柳次苷或者本發明第二方面任一項所述的提取物，并且其中基本上不合杠柳毒苷。

發明詳述：

本發明第一方面提供了一種制備杠柳次苷的方法，其包括以下步驟：

(1)使含有杠柳毒苷的底物與蝸牛酶混合，進行酶解反應，得到酶解粗提物；

(2)使所述酶解粗提物進行色譜層析，得到精制提取物；

(3)使所述精制提取物從甲醇和水的混合物中重結晶，得到杠柳次苷。

在本發明第一方面所述方法的一個實施方案中，其中所述底物可以是杠柳毒苷單體、含有杠柳毒苷的香加皮提取物、含有杠柳毒苷的香加皮藥材、或其組合。