[發明專利]一種杠柳次苷的制備方法

無效

• 申請號: 201010583339.0
• 申請日: 2010-12-13
• 公開（公告）號: CN102154417A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 潘桂湘;劉虹;王怡;高秀梅;劉二偉
• 申請（專利權）人: 天津中醫藥大學
• 主分類號: C12P19/56
• 分類號: C12P19/56
• 代理公司: 北京市惠誠律師事務所 11353
• 代理人: 雷志剛

1.一種制備杠柳次苷的方法，其包括以下步驟：

(1)使含有杠柳毒苷的底物與蝸牛酶混合，進行酶解反應，得到酶解粗提物；

(2)使所述酶解粗提物進行色譜層析，得到精制提取物；

(3)使所述精制提取物從甲醇和水的混合物中重結晶，得到杠柳次苷。

2.根據權利要求1的方法，其特征在于以下(a)至(h)中的任一項或多項：

(a)所述底物可以是杠柳毒苷單體、含有杠柳毒苷的香加皮提取物、含有杠柳毒苷的香加皮藥材、或其組合；

(b)所述底物(按杠柳毒苷計)與蝸牛酶的重量比為(1～10)∶1；

(c)所述酶解反應是在pH?3～7的緩沖液中進行的；

(d)所述酶解反應是在20℃～55℃下進行的；

(e)所述酶解反應是在pH?3～7的緩沖液中、在20℃～55℃下溫孵4h～48h來進行的；

(f)所述酶解反應是通過加入酶解終止劑來終止的；

(g)所述酶解反應在被終止之后，還任選包括用有機溶劑進行萃取的步驟；

(h)所述酶解反應在被終止之后，還包括用有機溶劑進行萃取，然后將有機層濃縮和/或干燥的步驟。

3.根據權利要求1或2的方法，其中所述色譜層析是選自以下的色譜層析方法：硅膠柱層析法、大孔樹脂柱層析法、反相C18柱色譜分離法、高速逆流色譜法、及其組合。

4.根據權利要求3的方法，其特征在于以下(a)至(e)中的任一項或多項：

(a)所述色譜層析是使用硅膠柱層析法，并且采用乙酸乙酯和石油醚的混合溶劑作為洗脫液；

(b)所述色譜層析是使用大孔樹脂柱層析法，并且用85～98％乙醇作為洗脫液；

(c)所述色譜層析是使用反相C18柱色譜分離法，并且用(50～70)∶(50～30)的甲醇∶水或者用(25～50)∶(75～50)的乙腈∶水作為流動相；

(d)所述色譜層析是使用高速逆流色譜法，并且酶解粗提物用氯仿-甲醇-水4∶3∶2～5∶4∶3震蕩溶解進樣，在溫度30～40℃下進行高速逆流色譜；

(e)所述步驟(3)的重結晶過程是使步驟(2)的精制提取物溶解于甲醇中，然后加入適量水而進行的。

5.根據權利要求1至4任一項的方法，其包括以下步驟：

(1)酶解：將含有杠柳毒苷的底物(按杠柳毒苷計)與蝸牛酶(1∶1～10∶1w/w)混合，加入pH?3～7的緩沖液，22℃～54℃下溫孵，4h～48h后加入試劑終止酶促反應，用乙酸乙酯萃取，將乙酸乙酯層濃縮干燥，得酶解粗提物；

(2)柱層析：將酶解粗提物進行硅膠柱層析，以薄層色譜法監測流份，合并含有杠柳次苷的流份，濃縮干燥，得精制提取物；

(3)重結晶：將精制提取物，用甲醇溶解后加入適量水，靜置，析出白色針狀結晶，以50％甲醇洗滌結晶，減壓干燥，得杠柳次苷。

6.根據權利要求1至5任一項的方法，其特征在于：

步驟(3)所得產物中含有80％(w/w)以上的杠柳次苷，和/或

步驟(3)所得產物中基本上不含杠柳毒苷。

7.一種包含杠柳次苷的提取物，其中以重量百分數計包含80％以上(或者優選85％以上，優選90％以上)的杠柳次苷。

8.根據權利要求7的提取物，其中基本上不含杠柳毒苷。

9.根據權利要求7或8的提取物，其是通過包括以下步驟的制備方法得到的：

(i)使含有杠柳毒苷的底物與蝸牛酶混合，進行酶解反應，得到酶解粗提物；

(ii)使所述酶解粗提物進行色譜層析，得到精制提取物；

(iii)使所述精制提取物從甲醇和水的混合物中重結晶，得到包含杠柳次苷的提取物；進一步地，上述步驟(i)至(iii)各自獨立地具有說明書第二方面任一個或多個實施方案所述的特征。

10.一種組合物，其包含杠柳次苷或者權利要求7-9任一項所述的提取物，并且其中基本上不含杠柳毒苷。