[發(fā)明專利]小鼠成纖維細(xì)胞Ⅲ型膠原的熒光定量PCR檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010581404.6
• 申請(qǐng)日: 2010-12-09
• 公開（公告）號(hào): CN102559849A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 余欣
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

1.一種小鼠成纖維細(xì)胞III型膠原的熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一，以小鼠III型前膠原基因中的內(nèi)含子序列SEQ?ID?NO：1為靶目標(biāo)，設(shè)計(jì)引物；

步驟二，利用堿基序列如SEQ?ID?NO：1所示的基因片段構(gòu)建重組質(zhì)粒；

步驟三，提取樣品的RNA，逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA；

步驟四，按照常規(guī)熒光定量PCR檢測(cè)方法檢測(cè)樣品中的III型前膠原基因表達(dá)的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠成纖維細(xì)胞III型膠原的熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征是，步驟一中，所述引物為：上游引物：5’-CAGAGGCTTTGATGGACGCA-3’，下游引物：5’-TCTCCCTTCGCACCGTTCTT-3’。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠成纖維細(xì)胞III型膠原的熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征是，步驟二中，所述重組載體使用的質(zhì)粒是pET-32a。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠成纖維細(xì)胞III型膠原的熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征是，步驟四中，所述熒光定量PCR檢測(cè)方法中，PCR單個(gè)循環(huán)為：95℃預(yù)變性2分鐘；95℃變性30秒，54℃退火30秒，72℃延伸40秒。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的小鼠成纖維細(xì)胞III型膠原的熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征是，步驟四中，所述熒光定量PCR檢測(cè)方法中，共32個(gè)PCR單個(gè)循環(huán)。