[發明專利]油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP232及其獲得方法

無效

• 申請號: 201010579087.4
• 申請日: 2010-12-08
• 公開（公告）號: CN102093986A
• 公開（公告）日: 2011-06-15
• 發明（設計）人: 彭俊華;任景
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢植物園
• 主分類號: C12N9/04
• 分類號: C12N9/04;C12N15/53;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 黃瑞棠

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域中的基因突變體，尤其涉及一種油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP²³²及其獲得方法。

背景技術

脂肪酸脫氫酶基因(fad2)是控制油酸向亞油酸轉化的關鍵基因，且關系到多不飽和脂肪酸的合成；而亞油酸是桐酸合成的底物。因而fad2基因的功能突變不僅會改變桐油中脂肪酸組分含量，而且會影響桐油的品質。目前通過人工誘發fad2基因的突變，抑制fad2基因的表達，獲得了高油酸含量的葵花籽油、大豆油等，而且在油菜中，不僅獲得了高油酸突變體品種，且利用轉基因獲得了特高油酸轉基因油菜株系。但是對于油桐中fad2基因的突變，目前國內外尚未見報道。

油桐是我國原產的多年生木本油料樹種，其種子榨出的桐油不僅是重要的工業原料也是重要的生物柴油原料。因而利用遺傳資源多樣性結合生物技術途徑，對于油桐進行脂肪酸組成的全方位改良和培育含特種脂肪酸的油桐品種，提升桐油品質及經濟價值具有重要科學與現實意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP²³²及其獲得方法。

本發明的目的是這樣實現的：

1、油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP²³²

油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP²³²是SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列中第232位堿基發生C→A突變，導致SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列中第78位氨基酸由脯氨酸(P)轉變為蘇氨酸(T)。

2、油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP²³²的獲得方法

(1)來源于油桐種質材料PT45或PT60，見表1。

表1突變體材料具體地理位置

(2)檢測步驟

①提取突變體材料葉片DNA；

②fad2基因編碼區的PCR擴增；

③DNA測序分析。

本發明具有下列優點和積極效果：

①本發明所涉及的fad2基因突變體SNP²³²導致了SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列中第78位氨基酸由脯氨酸(P)轉變為蘇氨酸(T)；

②本發明所涉及的fad2基因突變體SNP²³²種質材料中，SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸的變化導致了桐油中桐酸含量的增加；

③本發明所涉及的fad2基因突變體SNP²³²種質材料中，SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸的變化導致了桐油中不飽和脂肪酸含量的增加；

④本發明所涉及的fad2基因突變體SNP²³²種質材料中脂肪酸組分的變化對于利用生物技術途徑，進一步對桐油進行脂肪酸組成的全方位改良和培育含特種脂肪酸的油桐品種具有重要科學與現實意義。

由此可見，該基因突變體及相應的種質材料，對于提高桐酸的含量、調整桐油脂肪酸組分、改良桐油的品質等具有重要作用。

附圖說明

圖1是含SNP²³²突變體的種質材料PT45脂肪酸組分色譜圖；

圖2是含SNP²³²突變體的種質材料PT60脂肪酸組分色譜圖；

圖3是不含SNP²³²突變體的野生型種質材料PT292脂肪酸組分色譜圖；

圖4是利用Sequencher軟件對多個序列比對發現的SNP²³²反向測序序列峰圖(箭頭表示突變位點)。

具體實施方式

下面結合附圖和具體實施例，進一步闡述本發明：

1、檢測步驟

fad2基因其mRNA序列來自GenBank(AF525534.1)。

①提取突變體材料葉片DNA

采用改良的CTAB法。

②fad2基因編碼區的PCR擴增

模板DNA(20ng/μL)5μL；引物(10μM)各1μL；10×buffer(Mg²⁺Plus)2.5μL；Taq酶(5U/μL)0.2μL；dNTP(10mM)0.5μL；ddH₂O?15.3μL；總體積25μL。PCR反應程序為94℃預變性5min；94℃變性45s；67℃退火45s；72℃延伸1min；30個循環；最后72℃延伸5min；擴增產物在1.5％的瓊脂糖凝膠電泳中檢測。

③DNA測序分析