[發(fā)明專利]油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP232及其獲得方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010579087.4
• 申請(qǐng)日: 2010-12-08
• 公開（公告）號(hào): CN102093986A
• 公開（公告）日: 2011-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭俊華;任景
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院武漢植物園
• 主分類號(hào): C12N9/04
• 分類號(hào): C12N9/04;C12N15/53;C12Q1/68
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 黃瑞棠

1.一種油桐油酸脫氫酶基因fad2突變體SNP²³²，其特征在于：

油桐油酸脫氫酶基因突變體SNP²³²是SEQ?ID?NO：1所示的核苷酸序列中第232位堿基發(fā)生C→A突變，導(dǎo)致SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列中第78位氨基酸由脯氨酸P轉(zhuǎn)變?yōu)樘K氨酸T。

2.按權(quán)利要求1所述突變體SNP²³²的獲得方法，其特征在于：

(1)來源于油桐種質(zhì)材料PT45或PT60；

PT45，來源地是中國四川渠縣渠南鄉(xiāng)和平村，

緯度、經(jīng)度、海拔分別為30°48.9’N、106°55.8’E、266m；

PT60，來源地是中國四川寶興縣五龍鄉(xiāng)旁山上，

緯度、經(jīng)度、海拔分別為30°24.5’N、102°45.8’E、1092m；

(2)檢測(cè)步驟：

①提取突變體材料葉片DNA；

②fad2基因編碼區(qū)的PCR擴(kuò)增；

③DNA測(cè)序分析。

3.按權(quán)利要求2所述的獲得方法，其特征在于檢測(cè)步驟①：

采用改良的CTAB法。

4.按權(quán)利要求2所述的獲得方法，其特征在于檢測(cè)步驟②：

模板DNA，20ng/μL，5μL；引物，10μM，各1μL；10×buffer，Mg²⁺Plus，2.5μL；Taq酶，5U/μL，0.2μL；dNTP，10mM，0.5μL；ddH₂O?15.3μL；總體積25μL；PCR反應(yīng)程序?yàn)?4℃預(yù)變性5min；94℃變性45s；67℃退火45s；72℃延伸1min；30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸5min；擴(kuò)增產(chǎn)物在1.5％的瓊脂糖凝膠電泳中檢測(cè)。

5.按權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于檢測(cè)步驟③：

利用軟件Bioedit和clustalx對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行校正與比對(duì)，通過軟件Sequencher識(shí)別SNP。