[發明專利]嗎啡-氯胺酮膠體金法毒品檢測試卡

無效

• 申請號: 201010578686.4
• 申請日: 2010-12-08
• 公開（公告）號: CN102128930A
• 公開（公告）日: 2011-07-20
• 發明（設計）人: 姜燕
• 申請（專利權）人: 沈陽大學
• 主分類號: G01N33/64
• 分類號: G01N33/64;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/532
• 代理公司: 沈陽東大專利代理有限公司 21109
• 代理人: 戚羽

技術領域

本發明涉及一種二合一毒品檢測試卡。

背景技術

近年來吸毒人數均呈上升趨勢，從我國公安部禁毒委員會了解到，截止到目前為止，全國吸毒人數僅登記注冊的就達近100萬人。其中70%—80%吸食嗎啡、海洛因、鴉片類，其余20%-30%吸食氯胺酮和搖頭丸。保守估計我國吸毒人數在300-500萬人。海洛因、嗎啡等鴉片類毒品是罌粟膠質中的提取物或衍生物，在體內經過代謝可以轉變成嗎啡和嗎啡代謝物。因此尿液中嗎啡和嗎啡代謝物的存在表明尿樣提供者體內存在鴉片類毒品。氯胺酮用作毒品時稱為K粉，具有一定的精神依賴性。近年來在娛樂場所濫用日趨嚴重，嚴重威脅健康。人體服用的氯胺酮有70％—90％在肝內代謝并經尿液排出，一般在吸食后2－4小時內即可被檢出。

隨著我國禁毒工作的深入，需要接受毒品吸食普查人數也在成倍的增加。公安部要求，吸毒人員進戒毒所前必須做尿檢，治療期間需追蹤復查，出戒毒所后每人每年要復查6次。以往單一檢測操作繁瑣、費用昂貴的弊端，給緝毒人員在一線工作時帶來不便。傳統的同位素法檢測對于操作者及環境的污染極為嚴重;酶免疫定量檢測法需要較復雜儀器,不利于犯罪現場檢測。

發明內容

本發明提供一種嗎啡-氯胺酮膠體金法毒品檢測試卡，該毒品檢測試卡可同步檢測氯氨酮、和嗎啡等兩種毒品，并且快速、準確和節省檢材。

本發明的目的是這樣實現的：

本發明由一個封閉的塑料外殼包裝而成,該外殼的上層開有顯色孔和加樣孔,在外殼內腔裝有磁白板，磁白板上覆有膜結構，膜結構由下至上依次疊放樣品墊，吸水紙,?玻璃纖維素膜和硝酸纖維素膜。其中玻璃纖維素膜上包被有膠體金標記鼠抗氯胺酮單克隆抗體和膠體金標記鼠抗嗎啡單克隆抗體。硝酸纖維素膜上含有嗎啡、氯胺酮抗原和一種羊抗鼠多克隆抗體。與顯色孔對應的硝酸纖維素膜上用點膜機分別劃定兩條檢測線和一條質控線，其中一條檢測線為氯胺酮完全抗原，另一條檢測線為嗎啡完全抗原；質控線為純化后的羊抗鼠IgG?多抗。

所述的玻璃纖維素膜上包被的膠體金標記鼠抗氯胺酮單克隆抗體由如下方法制成：

1、氯胺酮結合抗原制備：用重氮化法將半抗原氯胺酮偶聯于載體蛋白BSA,形成偶聯抗原。制備過程如下,?取5毫克氯胺酮溶于0.1摩爾/升?HCl?,并預冷至0～5℃,加入10毫克NaNO₂,4℃攪拌6小時。然后加入20毫克BSA(預先溶于0.1摩爾/升?磷酸鹽緩沖液,pH8.6),4℃繼續攪拌6小時。用葡聚糖凝膠SephadexG-25凝膠過濾純化偶聯物,純化后凍干存于4℃備用。

2、小鼠免疫：以BSA偶聯氯胺酮免疫8?周齡BALB/C小鼠15?只,免疫劑量50微克/只,皮下分點注射。共免疫3?次,每次免疫間隔3周。最后1次免疫10天后,斷尾采血分離血清,用間接ELISA?法檢測血清抗體效價。若效價>10^-4即可用于細胞融合。

3、脾細胞的制備：末次免疫后3天摘眼球取血分離血清，并同時處死，浸泡碘酒5分鐘，無菌解剖取脾，用RPMI1640培養液洗二次后，研磨通過100目不銹鋼網，獲得游離細胞，再用氯化銨法溶解祛除紅細胞，然后計數脾細胞并用10％FBS-RPMI?1640培養液配制成2X10⁸個/毫升濃度用于細胞融合。

4、SP2/0細胞的培養與細胞融合：復蘇SP2/0細胞，于10％FBS-RPMI1640培養液中培養至對數生長期后配成4?X10⁷個/ml細胞濃度；分別取配制的上述濃度的脾細胞和SP2/0細胞各1毫升混合，使其比例為5：1；然后加入50%PEG?1毫升，于37℃，5%CO2孵箱內培養進行細胞融合。

5、融合細胞的培養及陽性雜交瘤的篩選與克隆：融合后的細胞置37℃,5%CO₂培養箱中以HAT、HT?培養基選擇培養。用間接ELISA法以BSA偶聯氯胺酮微克/毫升包被酶標板進行陽性篩選。對強陽性、細胞生長旺盛的孔進行3次有限稀釋克隆化。

6、抗氯胺酮單克隆抗體的測定與制備：給腹腔注射液體石蠟10天后的小鼠腹腔注射克隆化細胞株10⁷個細胞,7天后抽取腹水,以硫酸鈉鹽析法提純抗體,測其ELISA效價。以檢測樣品于492納米波長測得吸光值與陰性對照的比值≥2.1定為陽性，出現陽性結果的最大稀釋倍數為抗氯胺酮單克隆抗體的效價。測定后結果作為使用時稀釋倍數的依據。