[發明專利]一種大豆抗原蛋白過敏細胞模型及其應用

有效

• 申請號: 201010577271.5
• 申請日: 2010-12-07
• 公開（公告）號: CN102120984A
• 公開（公告）日: 2011-07-13
• 發明（設計）人: 馬曦;李德發;賀平麗;譙仕彥
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/02
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種大豆抗原蛋白過敏細胞模型及其應用。

背景技術

大豆作為人和動物優質的植物蛋白和油脂來源，具有極高的營養價值。其所含蛋白質約占大豆籽粒的40％。但是，大豆中含有胰蛋白酶抑制因子、凝集素、異黃酮、抗原蛋白等多種抗營養因子。其中大豆抗原蛋白是大豆中能引起人和畜禽過敏反應的一類蛋白質，主要包括：大豆疏水蛋白(免疫學命名為Gly?m1)、大豆殼蛋白(Gly?m2)、大豆抑制蛋白(Gly?m3)、大豆胰蛋白酶抑制因子、大豆球蛋白(glycinin)、β-伴大豆球蛋白(β-conglycinin)等。目前研究證實，大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白是含量最豐富，免疫原性較強的大豆抗原蛋白，兩者共占大豆籽實總蛋白的65-80％。

研究表明，在大豆抗原蛋白分子上有IgE抗原決定簇，被人和動物食入后，可引起致敏人群或動物體內IgE抗體升高，從而導致過敏反應的發生。此外，值得重視的是，某些種類的大豆抗原蛋白如大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白具有熱穩定特性，普通的熱處理對其破壞作用較小。例如，烘烤大豆粉中具有抗原活性的大豆抗原蛋白殘留量仍高達18％，這個量足以引起嬰兒的過敏反應。

由于抗原活性的存在，大豆抗原蛋白對仔豬、犢牛及其它幼齡畜禽的生長和健康造成了一定的危害。因此，將大豆進行適當的加工處理以減少或消除大豆抗原蛋白的抗原活性成了當前科學界的一個重要研究目標。目前已證實，豆粕、膨化大豆、發酵豆粕、大豆濃縮蛋白和大豆分離蛋白等大豆制品的抗原活性低于生大豆。但是，在大豆加工參數和大豆抗原蛋白抗原活性的致敏臨界值方面還沒有一個統一的認識，其原因主要是大豆抗原蛋白種類繁多，抗原活性的定量檢測技術非常薄弱。已有的定量檢測方法主要以抗血清測定、單克隆抗體ELISA技術、高效液相色譜分析、動物過敏性模型評價為主。這些方法從免疫學角度來看仍存在一定的缺陷，抗血清測定檢測的靈敏度較低，而且重復性差；單克隆抗體ELISA技術需要針對每種大豆抗原蛋白分別制備單克隆抗體，然后制備試劑盒，工程復雜而工作量巨大；高效液相色譜分析則無法體現免疫反應性，并且由于前處理過程繁瑣和需要昂貴的專門儀器而難以廣泛應用于大豆制品的現場檢測；同時，以上三種方法作為體外檢測方法，檢測的結果僅代表某種大豆抗原蛋白的含量，并不能直接顯示其抗原性的強弱。過敏性動物模型作為唯一的體內過敏性評價方法，雖然可以直接顯示過敏性強弱，但難以定量，同時完成評價需要大量的動物，工作量大，個體差異明顯，而且不符合動物保護和動物福利原則。

RBL細胞是1973年由英國學者Eccleston等從嗜堿性白血病大鼠中分離得到的；RBL-2H3細胞系是由美國Barsumian研究小組(1981)將RBL反復克隆獲得的亞系。由于RBL-2H3細胞系具有永生化特性，培養方法簡單，體外脫顆粒方法容易重復，所以是建立脫顆粒模型的最佳選擇。以前認為RBL細胞系是一種嗜堿性細胞，但近些年在對其糖蛋白量、蛋白酶標志和超微結構等的研究后發現，它是一種粘膜型的肥大細胞，現已廣泛用于研究肥大細胞體外脫顆粒的研究和運用。

發明內容

本發明的目的是提供一種制備大豆抗原蛋白過敏細胞模型的方法。

本發明提供的制備大豆抗原蛋白過敏細胞模型的方法，包括如下步驟：

將肥大細胞與大豆抗原蛋白特異性IgE抗體共孵育，孵育后的細胞，即為大豆抗原蛋白過敏細胞模型。

所述大豆抗原蛋白特異性IgE抗體通過如下方法制備：將大豆抗原蛋白免疫動物，得到抗血清，即得到大豆抗原蛋白特異性IgE抗體；

所述大豆抗原蛋白為大豆總抗原蛋白、大豆胰蛋白酶抑制因子、β-伴大豆球蛋白和/或大豆球蛋白。

所述大豆抗原蛋白過敏細胞模型為如下1)-4)中任一所述過敏細胞模型：

1)為通過如下方法制備：將肥大細胞和大豆胰蛋白酶抑制因子抗血清共孵育，得到孵育后的細胞，即為大豆胰蛋白酶抑制因子過敏細胞模型；

2)為通過如下方法制備：將肥大細胞和大豆總抗原蛋白抗血清共孵育，得到孵育后的細胞，即為大豆總抗原蛋白過敏細胞模型；

3)為通過如下方法制備：將肥大細胞和β-伴大豆球蛋白抗血清共孵育，得到孵育后的細胞，即為β-伴大豆球蛋白過敏細胞模型；

4)為通過如下方法制備：將肥大細胞和大豆球蛋白抗血清共孵育，得到孵育后的細胞，即為大豆球蛋白過敏細胞模型。

所述大豆胰蛋白酶抑制因子抗血清通過如下方法制備：將大豆胰蛋白酶抑制因子免疫動物，分離血清，即得到大豆胰蛋白酶抑制因子抗血清；