[發(fā)明專利]一種治療皮膚過敏和過敏性哮喘的注射劑及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010574276.2
• 申請日: 2010-12-06
• 公開（公告）號: CN102085218A
• 公開（公告）日: 2011-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓斌;張誠;張旭
• 申請（專利權(quán)）人: 北京賽爾泰和生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: A61K35/36
• 分類號: A61K35/36;A61K9/10;A61P11/06;A61P17/00;A61P37/08;C12N5/071;C12N5/073
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種治療皮膚過敏和過敏性哮喘的注射劑及其制備方法。

背景技術(shù)

長期以來治療皮膚過敏與過敏性哮喘就是醫(yī)學(xué)界的一個難題，目前多采用激素抗過敏與消炎治療，但療效較差，癥狀輕者可起到一定的治療作用，但對于反復(fù)發(fā)作者只能對病治療，且效果很差。皮膚過敏與過敏性哮喘均屬于自身免疫性疾病，其發(fā)病機理在于皮膚過敏與過敏性哮喘是由多種細(xì)胞特別是肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞參與的慢性氣道與皮膚炎癥，免疫病理學(xué)已經(jīng)證實在皮膚與呼吸道的慢性過敏性炎癥是相似的，均有Th2細(xì)胞、肥大/嗜堿細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞以及IgE的參與，參與的細(xì)胞因子如IL-4等炎性化學(xué)介質(zhì)。在敏感個體，與IgE結(jié)合的組織肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，在接觸變應(yīng)原后，遂被激活，釋放組織胺、白三烯和其他介質(zhì)。這種反應(yīng)輕者可引起皮膚過敏，重者可引起速發(fā)性的鼻部刺激癥狀，如由神經(jīng)介導(dǎo)的打噴嚏和流鼻涕，由血管充血引起的鼻塞等。在下呼吸道的速發(fā)癥狀是支氣管痙攣和黏液的高分泌，引起咳嗽，呼吸困難，胸悶和喘息。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服上述治療皮膚過敏與過敏性哮喘的藥物的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種見效快、療效持久的治療皮膚過敏與過敏性哮喘的注射劑。

本發(fā)明的另一個目的是提供這種注射劑的制備方法。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種治療皮膚缺損的注射劑，該填充劑主要由細(xì)胞成分組成，每毫升注射用填充劑中細(xì)胞成分的含量為1000萬個至5000萬個；所述細(xì)胞成分是用流產(chǎn)胎兒皮膚或新生兒切除的包皮或動物胚胎的真皮經(jīng)過體外低血清或無血清培養(yǎng)和擴增，收集得到的真皮成纖維前體細(xì)胞與成纖維細(xì)胞。

優(yōu)選地，在本發(fā)明所述注射劑中，所述的經(jīng)培養(yǎng)和擴增后收集到的成纖維前體細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的數(shù)量之比為50-70∶30-50。

本發(fā)明所述的注射劑除了細(xì)胞成分，還可以含有一些輔助成分，所述輔助成分可以是本領(lǐng)域常見的能夠做為細(xì)胞溶劑的成分，如維生素、葡萄糖、等滲生理鹽水等等。

本發(fā)明使用的低血清培養(yǎng)基僅需添加3％～5％胎牛血清，而傳統(tǒng)培養(yǎng)基通常加入約10％的新生牛血清，低血清培養(yǎng)基對于細(xì)胞生長、增殖、形態(tài)、活性和功能沒有不良影響，甚至有所改善。

此外，本發(fā)明還提供了一種所述治療皮膚過敏與過敏性哮喘的注射劑的制備方法，該方法步驟為：采用流產(chǎn)胎兒皮膚或新生兒切除的包皮或動物胚胎的真皮標(biāo)本進行分離、體外低血清或無血清培養(yǎng)和擴增，對所得到的成纖維前體細(xì)胞與成纖維細(xì)胞進行收集。

本發(fā)明所采集的皮膚組織是流產(chǎn)胎兒皮膚或新生兒切除的包皮或動物胚胎的皮膚。

在本發(fā)明所提供的填充劑制備方法中，將來源于流產(chǎn)胎兒皮膚或新生兒切除的包皮皮膚或動物胚胎皮膚，例如，1平方毫米至30平方毫米的皮膚，在加入了生長因子和活性材料的低血清或無血清培養(yǎng)液中進行體外培養(yǎng)和擴增，得到成纖維前體細(xì)胞與成纖維細(xì)胞。

所述體外低血清或無血清培養(yǎng)和擴增中，所述培養(yǎng)液的組成可以是本領(lǐng)域常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)液，例如，可以參見《細(xì)胞實驗指南》中的有關(guān)介紹(2001年，科學(xué)出版社出版，主編：D.L.斯佩克特，黃培唐翻譯)。優(yōu)選地，在體外全程無血清培養(yǎng)和擴增過程中，使用的培養(yǎng)液中還包括生長因子和活性材料。所述生長因子為選自：上皮生長因子、成纖維生長因子中的一種或多種；所述活性材料選自：氫化可的松、肝素中的一種或多種。所述上皮生長因子在培養(yǎng)液中的含量可以為1納克/毫升至5納克/毫升，優(yōu)選為3納克/毫升；所述成纖維生長因子在培養(yǎng)液中的含量可以為2納克/毫升至20納克/毫升，優(yōu)選為10納克/毫升；所述氫化可的松在培養(yǎng)液中的含量可以為0.2微克/毫升至2微克/毫升，優(yōu)選為1微克/毫升；所述肝素在培養(yǎng)液中的含量可以為2微克/毫升至20微克/毫升，優(yōu)選為10微克/毫升。上述的培養(yǎng)液和生長因子及活性材料可以是選自一個公司或者多個公司(如美國的Cascade公司、Sigma公司、Hyclne公司等)的市售產(chǎn)品。

在本發(fā)明所提供的注射劑制備方法中，所述體外培養(yǎng)和擴增可采用本領(lǐng)域常見的任何用于為獲得自體細(xì)胞的體外培養(yǎng)和擴增方法，如組織消化培養(yǎng)法、組織塊培養(yǎng)法等，優(yōu)選采用組織塊培養(yǎng)法。

下面進一步詳細(xì)說明本發(fā)明所提供的注射劑制備方法，但本發(fā)明并不因此而受到任何限制。

1、皮膚取材

用酒精消毒流產(chǎn)胎兒皮膚或新生兒切除的包皮或動物胚胎皮膚，用手術(shù)剪刀將表皮和真皮組織取下，放入組織保存液中。

2、皮膚組織培養(yǎng)前處理