[發明專利]篩選潛在抗阿留申病水貂的方法

無效

• 申請號: 201010573906.4
• 申請日: 2010-12-06
• 公開（公告）號: CN102154447A
• 公開（公告）日: 2011-08-17
• 發明（設計）人: 邵西群;楊福合;閆喜軍;刑秀梅;章秀婷;柴秀麗;劉琳玲;魯曉萍;榮敏
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院特產研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 王薇

1.篩選潛在抗阿留申病水貂的方法，其特征在于具體步驟如下：

1.1每年10-12月份前后，對后備留種群的貂逐一編號，趾尖采貂血樣或取貂尿樣；

1.2用改進的蛋白酶K-SDS酚法提取血樣或尿樣病毒核酸，用核酸助沉劑（Acryl?Carrier）提高阿留申病毒ssDNA的得率；

1.3阿留申病毒與腸炎細小病毒聯合PCR鑒別診斷所用引物:

par470：parF?5’tgcacaaattgtaacaccttggtc?3’,?

parR?5’cacctgttcttagtaagtgtactgg?3’；

adv537：advF?5’catatactccagctgcgccgttg?3’,

advR?5’cctgctggtattatccattcagga?3’；

PCR試驗條件：30ul體系引物終濃度par470?0.15uM，adv537?0.25uM，Mg²⁺?2.0mM,?dNTP??200?uM,Taq酶?1U；反應參數：94℃?2min30sec；94℃?32sec，53℃?30sec，72?℃?40sec，32cycles；70℃?4min?10℃?1min；該PCR方法可檢出最低病毒量低于0.3TCID₅₀；用于準確鑒別血液中是否存在阿留申病毒；

1.4同一貂血樣進行阿留申病毒PCR檢測與血清阿留申病毒抗體對流免疫電泳(CIEP)檢測，每種方法重復檢測兩次，兩種方法聯合檢測確定貂血液阿留申病毒及血清ADV?抗體情況；或直接用PCR檢測，區分貂血液是否攜帶阿留申病毒。

2.根據權利要求1所述的篩選潛在抗阿留申病水貂的方法，其特征在于所述的同一貂血樣進行阿留申病毒PCR與血清阿留申病毒抗體對流免疫電泳(CIEP)聯合檢測，確定阿留申病毒及貂血清ADV?抗體均為陰性的未感染貂，貂血清中阿留申病毒抗體陽性而阿留申病毒陰性的曾感染病毒的康復貂，阿留申病毒陽性的感染貂；或直接用PCR檢測血樣或尿樣可區分阿留申病毒陽性貂、阿留申病毒陰性貂，即可篩出阿留申病毒陰性的潛在抗ADV貂。