[發明專利]一種快速鑒別和檢測肝片吸蟲和大片吸蟲的LAMP檢測方法和試劑盒無效
| 申請號： | 201010570231.8 | 申請日： | 2010-12-02 |
| 公開（公告）號： | CN102021246A | 公開（公告）日： | 2011-04-20 |
| 發明（設計）人： | 艾琳;陳木新;林瑞慶;李淳;宋慧群;袁子國;李娟;李海龍;朱興全 | 申請（專利權）人： | 華南農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102 | 代理人： | 林麗明 |
| 地址： | 510642 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 鑒別 檢測 吸蟲 大片 lamp 方法 試劑盒 | ||
1.一種快速區分肝片吸蟲和大片吸蟲的LAMP檢測方法，其特征在于包括以下步驟：
??（1）肝片吸蟲和大片吸蟲成蟲樣本、尾蚴或蟲卵DNA的提??；
（2）采用特異性檢測引物應用恒溫加熱器技術進行擴增；所述特異性檢測引物的序列分別如SEQ?IDNO：1～SEQ?IDNO：12所示；
??（3）將擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳檢測，紫外燈下觀察；或者將產物經SYBR?green?I?顯色液顯色后，在凝膠成像系統下觀察。
2.根據權利要求1所述快速區分肝片吸蟲和大片吸蟲的LAMP檢測方法，其特征在于步驟（2）所述LAMP擴增條件為：肝片吸蟲?LAMP檢測溫度為61℃，大片吸蟲?LAMP檢測溫度為62℃，分別反應?45分鐘。
3.一種實現權利要求1所述方法的LAMP試劑盒，其特征在于包括以下組分：?
（1）?DNA裂解液：Nuclei?lysis?solution、EDTA、蛋白酶?K?和RNase?A?solution的混合溶液；
（2）LAMP反應液：dATP、dTTP、dGTP、dCTP、betaine、引物FIP、BIP、F3、B3、環引物Loop?F、LoopB和MgSO4的混合溶液；
（3）SYBR?green?I?顯色液：1:10倍稀釋液；
（4）肝片吸蟲DNA陽性對照和大片吸蟲DNA陽性對照。
4.根據權利要求3所述的LAMP試劑盒，其特征在于還含有Bst?大片段聚合酶組分。
5.根據權利要求4所述的LAMP試劑盒，其特征在于包括以下組分：?
（1）?DNA裂解液，27.5mL:?為100個反應的200μL?Nuclei?lysis?solution、50μL?pH?8.0的0.5M的EDTA、20μL?蛋白酶?K?（20mg/mL）和5μL?RNase?A?solution?(4mg/mL)的混合溶液；
（2）LAMP反應液，2.5mL：為終濃度200μM的dATP、dTTP、dGTP、dCTP，終濃度0.2mM?的引物FIP、BIP、F3、B3，0.8?μM?環引物Loop?F、LoopB，10?μM的betaine，10mM的MgSO4的混合溶液；
（3）SYBR?green?I?顯色液：1:10倍稀釋液；
（4）肝片吸蟲和大片吸蟲DNA陽性對照100μL和其他吸蟲DNA陽性對照100μL；
（5）Bst?DNA聚合酶，8U/μL，25μL。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于華南農業大學，未經華南農業大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201010570231.8/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
