[發(fā)明專利]一種檢測尖孢鐮刀菌的PCR方法及試劑盒有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010567807.5 | 申請日： | 2010-11-30 |
| 公開（公告）號： | CN101974650A | 公開（公告）日： | 2011-02-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李園;曹坳程;郭美霞;崔瑞;吳篆芳;趙海濱 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/06;G01N21/64 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11129 | 代理人： | 胡敬紅 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 鐮刀 pcr 方法 試劑盒 | ||
1.一種檢測尖孢鐮刀菌(Fusarium?oxysporum)的PCR方法，包括如下步驟：
(1)配制PCR反應(yīng)體系，
(2)在配制好的PCR反應(yīng)體系中加入待測模板，
(3)進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)；
其特征在于，所述PCR反應(yīng)體系中的引物的序列信息如下：
Fo1：5’-CGTCATTTCAACCCTCAAGCA-3’
Fo2：5’-ATATGCTTAAGTTCAGCGGGTAT-3’。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR方法，所述PCR反應(yīng)體系為：10×PCR?buffer?2μL，15mM?MgCl20.5μL，2.5mM?dNTPs?1.6μL，5μM引物各0.5μL，Taq酶1U，DNA模板1μL，其余為滅菌雙蒸水，終體積為20μL。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的PCR方法，所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)的程序為：94℃預(yù)變性3min；94℃變性1min，65℃退火1min，72℃延伸1min，共30個循環(huán)；最后72℃延伸10min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的PCR方法，所述PCR為熒光定量PCR。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的PCR方法，所述PCR反應(yīng)體系為：
反應(yīng)總體積為20μL，SYBR?Green?Supermix?10μL，10μM/L的Fo11μL，10μM/L的Fo21μL，模板11μL，余量為無菌雙蒸水。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的熒光定量PCR方法，所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)的程序如下：
第一步：95.00℃3分鐘，1個循環(huán)；
第二步：：95.0℃45秒，65.0℃45秒，55.0℃1分鐘，45個循環(huán)；
第三步：55.0℃10分鐘，95.0℃1分鐘，1個循環(huán)
第四步：55.0℃1分鐘
第五步：55.0℃10秒，80個循環(huán)。
7.一種檢測尖孢鐮刀菌的PCR試劑盒，其特征在于包含有具有如下序列信息的引物：
Fo1：5’-CGTCATTTCAACCCTCAAGCA-3’
Fo2：5’-ATATGCTTAAGTTCAGCGGGTAT-3’。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的PCR試劑盒，還包括熒光定量PCR所需的熒光染料。?
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