[發明專利]構建應用于高質量噬菌體抗體庫的表達載體

有效

• 申請號: 201010565730.8
• 申請日: 2010-11-30
• 公開（公告）號: CN102094035A
• 公開（公告）日: 2011-06-15
• 發明（設計）人: 童貽剛;安小平;米志強;潘博;王曉娜;張寶中
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N5/10;C12N7/01;C07K16/18
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種載體，按照如下方法制備：

1)將SacB的編碼基因1插入到pDF的多克隆位點間，得到中間載體PSBX；

2)將步驟1)得到的中間載體PSBX的BssHII酶切位點改為BglII酶切位點，得到中間載體PSGX；

3)將SacB的編碼基因2插入到步驟2)得到的中間載體PSGX的Nhe?I和NcoI酶切位點間，得到載體pDF-D-SacB；

所述SacB的編碼基因1為序列表的序列1自5’末端第30-1908位核苷酸；

所述SacB的編碼基因2為序列表中的序列2自5’末端第7-1857位核苷酸。

2.根據權利要求1所述的載體，其特征在于：

步驟1)中，所述將SacB的編碼基因1插入到pDF的多克隆位點為將SacB的編碼基因1插入到pDF的BssHII和XbaI酶切位點間。

3.一種載體，按照如下方法制備：

1)以puc19-SacB為模板，用引物對1進行PCR擴增，得到PCR產物1，將PCR產物1插入到pDF的BssHII和Xba?I酶切位點間，得到中間載體PSBX；所述PCR產物1即為SacB的編碼基因1，所述SacB的編碼基因1為序列表的序列1自5’末端第30-1908位核苷酸；

所述引物對1中的一條引物的核苷酸序列為序列表中的序列5，所述引物對1中的另一條引物的核苷酸序列為序列表中的序列6；

2)將步驟1)得到的中間載體PSBX上的BssHII酶切位點改變為BglII酶切位點，得到中間載體PSGX；

3)以pUC19-SacB為模板，用引物對2進行PCR擴增，得到PCR產物2，將得到的PCR產物2插入到步驟2)得到的中間載體PSGX的Nhe?I和Nco?I位點間，得到重組載體pDF-D-SacB；所述PCR產物2即為SacB的編碼基因2，所述SacB的編碼基因2為序列表中的序列2自5’末端第7-1857位核苷酸；

所述引物對2中的一條引物的核苷酸序列為序列表中的序列7，所述引物對2中的另一條引物的核苷酸序列為序列表中的序列8。

4.含有權利要求1-3中任一所述的載體的轉基因細胞系或重組菌或重組病毒。

5.權利要求1-3中任一所述的載體在制備噬菌體抗體庫中的應用；

或權利要求4所述轉基因細胞系或重組菌或重組病毒在制備噬菌體抗體庫中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：

所述應用中，所述抗體為抗乙肝表面抗原抗體。