[發明專利]一種新型高分子脂質體及其制備方法

無效

• 申請號: 201010563409.6
• 申請日: 2010-11-26
• 公開（公告）號: CN102058534A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發明（設計）人: 常津;王生;蘇文雅;王漢杰;廖振宇
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K47/34;C08G69/48;C08G69/10
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 王麗

技術領域

本發明涉及一種新型高分子脂質體及其制備方法，屬于藥物技術領域。

背景技術

脂質體(liposome)是由磷脂或其他類脂化合物雙層膜構成的，當兩性分子如磷脂和鞘脂分散于水相時，分子的疏水尾部傾向于聚集在一起，避開水相，而親水頭部暴露在水相，形成具有雙分子層結構的的封閉囊泡。脂質體是目前用做藥物基因載體常見的制劑手段之一。但是以傳統的卵磷脂、膽固醇制備的常規脂質體在體內多被網狀內皮系統(reticuloendothelial?system，RES)吞噬，在血液循環中駐留時間較短。并且其物理化學穩定性差，儲存和應用過程中容易發生融合聚集，疏水性藥物包封率低，包封藥物容易泄漏；藥物突釋，官能團少，不易進行表面修飾，無靶向性、功能單一；用做基因載體時基因轉染效率仍顯著低于病毒載體；制備和純化步驟多等。近年來，開發新型脂質體的研究受到廣泛關注。

王漢杰等(Hanjie?Wang，Peiqi?Zhao，Xiaofei?Liang，et?al.Folate-PEG?coated?cationic?modified?chitosan-Cholesterol?liposomes?for?tumor-targeted?drug?delivery[J].Biomaterials，2010，31(14)：4129-2138)使用聚乙二醇(PEG)及葉酸修飾的賴氨酸殼聚糖十八烷基季銨鹽(OQLCS)代替卵磷脂，與膽固醇通過反相蒸發法或薄膜分散法制備了一種高分子脂質體，聚乙二醇修飾延長了高分子脂質體在血液中的駐留時間，葉酸修飾賦予了高分子脂質體靶向性能。這種高分子脂質體與傳統脂質體相比具有較好的緩控釋功能，較高的藥物包封率，更高的物理化學穩定性，并且由于其表面帶正電，可吸附攜帶基因，用做基因載體。但是由于賴氨酸殼聚糖十八烷基季銨鹽分子鏈上含有大量氨基，使制備的高分子脂質體具有很強的正電性，因而使其具有很大的細胞毒性，限制了其應用。

發明內容

鑒于目前脂質體存在的缺陷，為了使脂質體更好的應用于藥物基因載體，本發明提供一種Zeta正電性低，細胞毒性小，粒徑更均勻的新型高分子脂質體及其制備方法。

γ-聚谷氨酸(γ-Polyglutamic?acid，γ-PGA)是由L-谷氨酸、D-谷氨酸通過γ-酰胺鍵結合形成的一種水溶性高分子氨基酸聚合物，具有良好的生物相容性和生物降解性，可食用，在體內降解產物為氨基酸，對人體無毒害。對γ-聚谷氨酸進行雙親性改性后，可與膽固醇制備一種高分子脂質體，這種高分子脂質體具有操作簡便、適用性強、成本低的優點，并且粒徑分布更為均勻，體系穩定，由于γ-聚谷氨酸側鏈含有大量的羧基，容易進行多功能化且羧基帶有負電性，所以其細胞毒性較低。這種高分子脂質體可同時或分別包載水溶性、油溶性和雙親性物質，包括藥物、基因、磁性顆粒和量子點等，并且在高分子脂質體表面可連接多種靶向制劑。

本發明首先利用γ-聚谷氨酸(重均分子量30000-40000)與二甲基環氧丙基十八烷基氯化銨反應制備了一種雙親性高分子γ-聚谷氨酸十八烷基季銨鹽(OQPGA)，與賴氨酸殼聚糖十八烷基季銨鹽相比，由于γ-聚谷氨酸十八烷基季銨鹽分子鏈上正電性基團少，使其電性相對較低，因而用做載體時具有較小的細胞毒性。然后利用γ-聚谷氨酸十八烷基季銨鹽與膽固醇通過反相蒸發法或薄膜分散法制備了這種新型高分子脂質體。如圖3粒度分析測試結果所示，制備的這種高分子脂質體粒徑小于150nm，可以在血液中自由運行。如圖2透射照片所示，其粒徑均勻，分散性好。如圖4的Zeta電位分析圖，Zeta電位正電性較低，因而可降低正電性造成的細胞毒性。

本發明的技術方案如下：

本發明的一種新型高分子脂質體，是二甲基環氧丙基十八烷基氯化銨與γ-聚谷氨酸反應，形成γ-聚谷氨酸十八烷基季銨鹽，結構式如下：

該雙親性高分子與膽固醇制備成一種新型高分子脂質體，粒徑在70～130nm，Zeta電位為6～8mV。

γ-聚谷氨酸十八烷基季銨鹽制備步驟如下：

a.將原料質量份數配比為：γ-聚谷氨酸∶二甲基環氧丙基十八烷基氯化銨＝1∶25～50加入到反應器，然后向反應器中加入溶劑異丙醇，磁力攪拌，加熱至50～70℃，冷凝回流反應1-5天；

b.反應結束后，將產物使用旋轉蒸發儀將異丙醇蒸出，隨后將產物放入8000-14000的透析袋中透析3-10天，取下層凝膠，過濾凍干，即得γ-聚谷氨酸十八烷基季銨鹽。

本發明的新型高分子脂質體制備方法，采用反相蒸發法，制備步驟如下：