[發明專利]測定血清中結合珠蛋白的方法及其檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201010562220.5
• 申請日: 2010-11-23
• 公開（公告）號: CN102128935A
• 公開（公告）日: 2011-07-20
• 發明（設計）人: 夏另朝;張筠
• 申請（專利權）人: 中生北控生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/536
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王加嶺;張慶敏

技術領域

本發明涉及一種免疫學檢測方法，具體地說，涉及一種血清中結合珠蛋白的免疫學檢測方法及其檢測試劑盒。

背景技術

結合珠蛋白(Haptoglobin，簡稱HP)又稱觸珠蛋白，廣泛存在于人類和許多哺乳動物的血液及其它體液中，個體內的含量比較穩定，其生物合成和降解主要在肝臟中進行。結合珠蛋白具有結合游離血紅蛋白的能力，作用類似于血紅蛋白的轉運蛋白，一分子的結合珠蛋白可結合一分子的游離血紅蛋白并形成復合物，復合物在血中很快地被單核-巨噬細胞處理掉。此過程能阻止血紅蛋白從腎小球濾過，避免游離血紅蛋白對腎臟的損害。在這一代謝過程中，結合珠蛋白也被降解，表現為血中結合珠蛋白水平降低，約3～4天后血中結合珠蛋白可恢復到正常濃度。

臨床檢測血清結合珠蛋白水平，結合病人的臨床表現，可以確定是否發生了血管內溶血性疾病，在臨床上常用于診斷如陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥、吞豆病以及先天性無結合珠蛋白血癥等。還有一些其它類型的血管內溶血和部分血管外溶血時結合珠蛋白可降低，其降低程度常與病性輕重相一致。如溶血性貧血以紅細胞平均壽命縮短為特征，而紅細胞平均壽命縮短的主要原因是紅細胞膜被破壞或其完整性的改變。依據紅細胞破壞機制的不同而設計的溶血試驗可幫助確診不同種類的溶血性貧血。紅細胞被破壞后的最顯著特征是紅細胞內的血紅蛋白釋放入血漿。因此，血紅蛋白釋放量增加時相關檢測項目的開展是了解紅細胞是否被破壞的最直觀方法，結合珠蛋白水平的檢測即是這種方法的最佳應用。

除作為溶血診斷指標外，近年來隨著研究的不斷深入，結合珠蛋白作為多種疾病新的標志物正逐步得到基礎及臨床研究的驗證，并已應用于臨床檢驗。如急性或慢性肝病患者血清結合珠蛋白水平降低，而肥胖癥等自身免疫性炎癥患者血清結合珠蛋白水平升高，而且升高或降低與病性的嚴重程度及預后有關。

血清結合珠蛋白水平還與惡性腫瘤、腎病、心腦血管病、肺部疾病、糖尿病并發癥、組織損傷及各種感染高度相關。其中惡性腫瘤患者血清結合珠蛋白水平升高的原因一是結合珠蛋白屬于急性期時相反應蛋白，二是腫瘤細胞壞死以及合并感染；癌癥患者特別是伴有癌組織壞死時，血清結合珠蛋白可上升至正常水平的5～8倍。此外，結合珠蛋白尚有抑制前列腺素合成、抑制細菌、促進血管生成及重要的免疫作用，結合珠蛋白的這些生理功能與防止冠心病的發生發展密切相關，也是監測缺血性心臟病、心肌梗死的較好的標志物之一。

目前臨床檢測結合珠蛋白的方法是血紅蛋白結合法，根據結合珠蛋白和血紅蛋白等摩爾結合的特點，采用火箭電泳法檢測，即向被測血清中加入過量的血紅蛋白，血清中的結合珠蛋白與血紅蛋白結合生成復合物，通過火箭電泳后分離出血紅蛋白和復合物兩條區帶，通過一系列操作，計算HP的濃度。該方法操作步驟復雜且繁瑣，顯示結果速度慢、誤差大。顯示的結果是血紅蛋白的含量，只間接反映結合珠蛋白的含量，在臨床上未能廣泛開展。

該發明提供一種簡潔快速的檢測血清結合珠蛋白的方法，即免疫比濁法。該方法依據結合珠蛋白是一種人體蛋白質，蛋白質本身具有抗原性，利用抗原抗體結合后產生凝聚的原理，設計的一種測定方法。利用血清樣品中的結合珠蛋白與試劑中適量的特異性抗體結合，形成不溶性的免疫復合物，反應液吸光度的改變與樣品中結合珠蛋白的含量呈正相關。此法的優點是病人血清不需要特殊的處理，便可在全自動生化分析儀上進行常規測定。結果是直接顯示結合珠蛋白的含量。

發明內容

本發明的目的是提供一種簡潔快速的檢測血清中結合珠蛋白的方法，即免疫比濁法及其檢測試劑盒。

為了實現本發明目的，本發明的一種測定血清中結合珠蛋白的方法，其是將血清樣品與含有結合珠蛋白抗體的試劑反應，形成不溶性的免疫復合物，在抗體量一定的條件下，根據反應液前后吸光度的改變，測定血清樣品中結合珠蛋白的含量。

具體地，本發明的目的可采用以下技術措施進一步實現：

步驟1)將血清樣品與試劑R1按1-10∶250(優選3∶250)的體積比混合，讀出吸光度OD₁；

步驟2)向上述混合液中按1-6∶1(優選3∶1)的體積比加入含有結合珠蛋白抗體的試劑R2，讀出吸光度OD₂；