[發(fā)明專利]一種輔助鑒定馬鈴薯A病毒的試劑及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010561134.2
• 申請日: 2010-11-26
• 公開（公告）號: CN102002535A
• 公開（公告）日: 2011-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 耿金培;趙文軍;粟智平;魯閩;陳洪俊;楊益娥;朱水芳
• 申請（專利權(quán)）人: 煙臺出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術(shù)中心;中國檢驗檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種輔助鑒定馬鈴薯A病毒的試劑及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

馬鈴薯A病毒(Potato?virus?A，PVA)，屬于馬鈴薯Y病毒屬(Potyvirus)成員，主要在日本、美國、歐洲各國發(fā)生，我國局部分布，正在采取控制措施。PVA是我國一種重要的進境檢疫性植物病毒。

馬鈴薯A病毒的自然寄主要為馬鈴薯，也可侵染其他茄科植物。PVA單獨侵染引起花葉或皺葉，對馬鈴薯影響較大，嚴(yán)重時可造成減產(chǎn)40％以上(程曄，陳炯，陳劍平，杭州郊區(qū)馬鈴薯A病毒分離物的基因組3’-末端序列測定及系統(tǒng)化分析[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報，2002，14(2)：71-75.)。若與其它病毒如馬鈴薯X、Y病毒和馬鈴薯M病毒等復(fù)合侵染，則加重癥狀和產(chǎn)量損失，危害更大(Hooker?WJ.Compendium?of?Potatodisease[M].St.Paul.MN：The?American?Phytopathological?Society，1981.)。PVA能被多種蚜蟲非持久性傳播；另外，該病毒在馬鈴薯上系統(tǒng)侵染，能夠進入薯塊，薯塊帶毒率高，因此也能隨種薯和組培苗傳播。由于有蚜蟲，該病毒在田間擴散容易，特別是馬鈴薯和其他茄科作物在同一地區(qū)出現(xiàn)時，能加速該病毒的擴散。當(dāng)種薯生產(chǎn)體系尚未完全建立，自留地比較普遍時，該病毒極易擴散。

馬鈴薯具有很高的食用和經(jīng)濟價值，近年來，已上升為我國第四大糧食作物，對于維護我糧食安全具有重要意義。許多國家看好中國馬鈴薯市場，大量的馬鈴薯種薯輸入或?qū)⒁斎胛覈ＲM的馬鈴薯種薯攜帶馬鈴薯A病毒的機率極大。為了維護我國馬鈴薯這一巨大產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展、防止馬鈴薯A病毒隨馬鈴薯種薯等進境物傳入中國并盡量減少國際貿(mào)易摩擦，開發(fā)出快速、靈敏檢測馬鈴薯A病毒的先進的技術(shù)，意義重大。

目前，檢測馬鈴薯A病毒的方法主要以酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)為主(王秀芬，劉偉等，引進加拿大馬鈴薯種薯中病毒的檢測[J].植物檢疫，2002，16(1)：16-18.；劉洪義，李明福等，黑龍江馬鈴薯病毒病的普查及鑒定[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2006，37(3)：307-310.；高海霞，鄒明強等，流式微球一步法快速免疫檢測馬鈴薯A病毒[J].微生物學(xué)報，48(3)：380-384.)，也有少數(shù)采用RT-PCR凝膠電泳技術(shù)的研究報道(吳興泉，謝聯(lián)輝等，福建馬鈴薯A病毒的分子鑒定及檢測技術(shù)[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，2004，12(1)：90-95.；袁青，殷幼平等，二重RT-PCR快速檢測馬鈴薯病毒的方法[J].植物檢疫，2005，19(3)：135-138.)。ELISA技術(shù)操作步驟繁瑣、檢測周期長、靈敏度低、易出現(xiàn)假陽性；PCR凝膠電泳技術(shù)較ELISA在多個方面有所提高，但易于造成污染。未見采用實時熒光PCR檢測PVA的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種輔助鑒定馬鈴薯A病毒的試劑及其應(yīng)用。

本發(fā)明提供的輔助鑒定馬鈴薯A病毒的試劑，包括特異引物；所述特異引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA組成。

所述試劑可由所述特異引物、特異探針甲和特異探針乙組成；所述特異探針甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述特異探針乙的核苷酸序列如序列表的序列6所示。

所述特異探針甲可為TaqMan探針，核苷酸序列如序列表的序列3所示。所述特異探針乙可為TaqMan探針，核苷酸序列如序列表的序列6所示。

所述試劑可用于制備輔助鑒定馬鈴薯A病毒的試劑盒。

本發(fā)明還保護一種輔助鑒定馬鈴薯A病毒的試劑盒，它包括所述試劑。

所述試劑可用于輔助鑒定馬鈴薯A病毒。

本發(fā)明還保護一種輔助鑒定馬鈴薯A病毒的方法，包括如下步驟：以待測病毒的cDNA為模板，用特異引物對甲進行PCR，得到PCR產(chǎn)物甲；以待測病毒的cDNA為模板，用特異引物對乙進行PCR，得到PCR產(chǎn)物乙；如果PCR產(chǎn)物甲為73bp且PCR產(chǎn)物乙為76bp，待測病毒為候選的馬鈴薯A病毒；所述特異引物對甲為序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引物對；所述特異引物對乙為序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA組成的引物對。