[發明專利]一種輔助鑒定馬鈴薯A病毒的試劑及其應用

無效

• 申請號: 201010561134.2
• 申請日: 2010-11-26
• 公開（公告）號: CN102002535A
• 公開（公告）日: 2011-04-06
• 發明（設計）人: 耿金培;趙文軍;粟智平;魯閩;陳洪俊;楊益娥;朱水芳
• 申請（專利權）人: 煙臺出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心;中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種輔助鑒定馬鈴薯A病毒的試劑，包括特異引物；所述特異引物由序列表的序列1所示DNA、序列表的序列2所示DNA、序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA組成。

2.如權利要求1所述的試劑，其特征在于：所述試劑由所述特異引物、特異探針甲和特異探針乙組成；所述特異探針甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述特異探針乙的核苷酸序列如序列表的序列6所示。

3.如權利要求2所述的試劑，其特征在于：所述特異探針甲為TaqMan探針；所述特異探針乙為TaqMan探針。

4.權利要求1至3中任一所述的試劑在制備輔助鑒定馬鈴薯A病毒的試劑盒中的應用。

5.一種輔助鑒定馬鈴薯A病毒的試劑盒，包括權利要求1至3中任一所述的試劑。

6.權利要求1至3中任一所述的試劑在輔助鑒定馬鈴薯A病毒中的應用。

7.一種輔助鑒定馬鈴薯A病毒的方法，包括如下步驟：以待測病毒的cDNA為模板，用特異引物對甲進行PCR，得到PCR產物甲；以待測病毒的cDNA為模板，用特異引物對乙進行PCR，得到PCR產物乙；如果PCR產物甲為73bp且PCR產物乙為76bp，待測病毒為候選的馬鈴薯A病毒；所述特異引物對甲為序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引物對；所述特異引物對乙為序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA組成的引物對。

8.一種輔助鑒定馬鈴薯A病毒的方法，包括如下步驟：以待測病毒的cDNA為模板，用特異引物對甲和特異探針甲進行實時熒光PCR，得到擴增曲線甲；以待測病毒的cDNA為模板，用特異引物對乙和特異探針乙進行實時熒光PCR，得到擴增曲線乙；根據擴增曲線甲和擴增曲線乙判斷待測病毒是否為候選的馬鈴薯A病毒；所述特異引物對甲為序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引物對；所述特異引物對乙為序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA組成的引物對；所述特異探針甲為TaqMan探針，核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述特異探針乙為TaqMan探針，核苷酸序列如序列表的序列6所示。

9.如權利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述待測病毒為馬鈴薯A病毒、馬鈴薯V病毒、馬鈴薯Y病毒或香石竹環斑病毒。

10.一種檢測待測樣本中是否含有馬鈴薯A病毒的方法，包括如下步驟：

(1)提取待測樣本的總RNA，反轉錄為cDNA；

(2)以所述cDNA為模板，用特異引物對甲和特異探針甲進行實時熒光PCR，得到擴增曲線甲；以所述cDNA為模板，用特異引物對乙和特異探針乙進行實時熒光PCR，得到擴增曲線乙；根據擴增曲線甲和擴增曲線乙判斷待測樣本中是否含有馬鈴薯A病毒；所述特異引物對甲為序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引物對；所述特異引物對乙為序列表的序列4所示DNA和序列表的序列5所示DNA組成的引物對；所述特異探針甲為TaqMan探針，核苷酸序列如序列表的序列3所示；所述特異探針乙為TaqMan探針，核苷酸序列如序列表的序列6所示。