[發(fā)明專利]一種利用微生物發(fā)酵法從紅豆杉中提取紫杉醇的方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010560051.1
• 申請(qǐng)日: 2010-11-23
• 公開（公告）號(hào): CN102071230A
• 公開（公告）日: 2011-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李民生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 李民生
• 主分類號(hào): C12P17/02
• 分類號(hào): C12P17/02
• 代理公司: 安徽合肥華信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種利用微生物發(fā)酵法從紅豆杉中提取紫杉醇的方法。

背景技術(shù)

紫杉醇是從紅豆杉中分離得到的一種天然抗癌藥物，它具有抑制腫瘤生長的作用。由于紫杉醇的作用機(jī)理獨(dú)特、療效顯著，因此已用于肺癌、卵巢癌、乳腺癌等的臨床治療。對(duì)于紫杉醇的高效提取成為藥品行業(yè)研究的重點(diǎn)。紫杉醇資源稀缺，價(jià)格昂貴，因此，采取有效方法提高其收率是降低紫杉醇成本的關(guān)鍵因素。目前提取紅豆杉紫杉醇的技術(shù)主要有酸降解、堿降解等化學(xué)法。這類方法的缺點(diǎn)是往往導(dǎo)致有效成分變性，產(chǎn)品中的有害殘留較高且難以去除。物理法方法如超聲波、碾壓、微波、氣流粉碎等物理作用，缺點(diǎn)是有效物質(zhì)很難提取充分。由于紅豆杉細(xì)胞組織中具有一層堅(jiān)硬的細(xì)胞壁，采用常規(guī)方法難以使其細(xì)胞充分破壁，且大量使用有機(jī)溶劑，普遍存在提取周期長、收率低、產(chǎn)品含有機(jī)物污染等缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種簡單方便、回收率高、成本低廉的從人工種植南方紅豆杉中提取紫杉醇的方法，主要是通過生物酶解法提取工藝，該方法對(duì)紫杉醇提取充分。這種利用微生物發(fā)酵法提取紫杉醇，有利于破壞植物細(xì)胞壁，有利于紫杉醇的浸出，使提取時(shí)間縮短，提取工藝簡化，且提高了提取效率、降低了提取成本也不會(huì)產(chǎn)生類似化學(xué)方法所帶來的有機(jī)物污染。

為實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

2、一種利用微生物發(fā)酵法從紅豆杉中提取紫杉醇的方法，其特征在于利用微生物發(fā)酵法從紅豆杉里提取紫杉醇，具體包括以下步驟：

(1)將紅豆杉枝葉破碎呈粉末狀；

(2)LB培養(yǎng)基的配制：按配方比例分別稱取下列物質(zhì)：粉末狀的紅豆杉枝葉28-31g、蛋白胨0.5-1.5g、酵母膏1.5-2.5g、瓊脂粉13-16g、NaCl18-12g，放入燒杯中，加入1000ml蒸餾水并加熱溶解，用NaOH溶液或HCl溶液調(diào)整溶液pH至7.0-7.5；然后高溫滅菌、擱置斜面，在溫度為28-32℃下，培養(yǎng)24-48小時(shí)后，轉(zhuǎn)入3-4℃冰箱里保存?zhèn)溆茫?/p>

(3)將酵母菌接種到斜面培養(yǎng)基中，進(jìn)行活化處理；

(4)種子培養(yǎng)基：在1000ml蒸餾水中，加入酵母膏1.5-2.5g、MgSO4·7H₂O0.15-0.25g、檸檬酸0.40-0.44g、KH₂PO42.5-3.5g，NH₄Cl?1.5-2.5g、CaCl₂0.08-0.12g、粉末狀的紅豆杉枝葉28-32kg進(jìn)行混合作為種子培養(yǎng)基；

(5)發(fā)酵培養(yǎng)基：在1000ml蒸餾水中，加入酵母膏0.5-1.5g、Mg8O₄·7H₂O0.15-0.25g、檸檬酸0.40-0.44g、KH₂PO₄0.5-1.5g、NH₄Cl?5.3-5.5g、CaCl₂0.08-0.12g、粉末狀的紅豆杉枝葉38-42g、MnCl₂0.01-0.012g混合制得發(fā)酵培養(yǎng)基；

(6)種子制備：取步驟(3)活化后的酵母菌適量接入到步驟(4)培養(yǎng)的種子培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)液的溫度為30～40℃，轉(zhuǎn)速80～110rpm，培養(yǎng)24～48小時(shí)，轉(zhuǎn)入二代培養(yǎng)基中，調(diào)節(jié)pH為7.5～9.0，30～40℃培養(yǎng)5～12小時(shí)，制備二級(jí)種子，備用；

(7)發(fā)酵培養(yǎng)：將發(fā)酵液裝入發(fā)酵罐內(nèi)，裝載量為50-85％，將步驟(6)制備的二級(jí)種子接入其中，接種量為10～20％，再將粉末狀的紅豆杉枝葉裝入其中，溫度30～40℃，攪拌速率80～110rpm條件下進(jìn)行發(fā)酵，控制發(fā)酵液的pH值為6～8，發(fā)酵4-7天；

(8)將發(fā)酵好的發(fā)酵液通過離心分離，收集上層液體；

(9)將收集的液體進(jìn)行低溫濃縮，噴霧干燥，得到高含量的紫杉醇干品。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明利用微生物發(fā)酵法提取紫杉醇，有利于破壞植物細(xì)胞壁，有利于紫杉醇的浸出，使提取時(shí)間縮短，提取工藝簡化，且提高了提取效率、降低了提取成本也不會(huì)產(chǎn)生類似化學(xué)方法所帶來的有機(jī)物污染。

具體實(shí)施方式

3、一種利用微生物發(fā)酵法從紅豆杉中提取紫杉醇的方法，其特征在于利用微

生物發(fā)酵法從紅豆杉里提取紫杉醇，具體包括以下步驟：

(1)將紅豆杉枝葉破碎呈粉末狀；