[發(fā)明專利]一種利用微生物發(fā)酵法從紅豆杉中提取紫杉醇的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010560051.1
• 申請(qǐng)日: 2010-11-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102071230A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李民生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 李民生
• 主分類號(hào): C12P17/02
• 分類號(hào): C12P17/02
• 代理公司: 安徽合肥華信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 34112
• 代理人: 余成俊

1.一種利用微生物發(fā)酵法從紅豆杉中提取紫杉醇的方法，其特征在于利用微生物發(fā)酵法從紅豆杉里提取紫杉醇，具體包括以下步驟：

(1)將紅豆杉枝葉破碎呈粉末狀；

(2)LB培養(yǎng)基的配制：按配方比例分別稱取下列物質(zhì)：粉末狀的紅豆杉枝葉28-31g、蛋白胨0.5-1.5g、酵母膏1.5-2.5g、瓊脂粉13-16g、NaCl18-12g，放入燒杯中，加入1000ml蒸餾水并加熱溶解，用NaOH溶液或HCl溶液調(diào)整溶液pH至7.0-7.5；然后高溫滅菌、擱置斜面，在溫度為28-32℃下，培養(yǎng)24-48小時(shí)后，轉(zhuǎn)入3-4℃冰箱里保存?zhèn)溆茫?/p>

(3)將酵母菌接種到斜面培養(yǎng)基中，進(jìn)行活化處理；

(4)種子培養(yǎng)基：在1000ml蒸餾水中，加入酵母膏1.5-2.5g、MgSO4·7H₂O0.15-0.25g、檸檬酸0.40-0.44g、KH₂PO42.5-3.5g，NH₄Cl?1.5-2.5g、CaCl₂0.08-0.12g、粉末狀的紅豆杉枝葉28-32kg進(jìn)行混合作為種子培養(yǎng)基；

(5)發(fā)酵培養(yǎng)基：在1000ml蒸餾水中，加入酵母膏0.5-1.5g、MgSO₄·7H₂O0.15-0.25g、檸檬酸0.40-0.44g、KH₂PO₄?0.5-1.5g、NH₄Cl?5.3-5.5g、CaCl₂0.08-0.12g、粉末狀的紅豆杉枝葉38-42g、MnCl₂?0.01-0.012g混合制得發(fā)酵培養(yǎng)基；

(6)種子制備：取步驟(3)活化后的酵母菌適量接入到步驟(4)培養(yǎng)的種子培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)，培養(yǎng)液的溫度為30～40℃，轉(zhuǎn)速80～110rpm，培養(yǎng)24～48小時(shí)，轉(zhuǎn)入二代培養(yǎng)基中，調(diào)節(jié)pH為7.5～9.0，30～40℃培養(yǎng)5～12小時(shí)，制備二級(jí)種子，備用；

(7)發(fā)酵培養(yǎng)：將發(fā)酵液裝入發(fā)酵罐內(nèi)，裝載量為50-85％，將步驟(6)制備的二級(jí)種子接入其中，接種量為10～20％，再將粉末狀的紅豆杉枝葉裝入其中，溫度30～40℃，攪拌速率80～110rpm條件下進(jìn)行發(fā)酵，控制發(fā)酵液的pH值為6～8，發(fā)酵4-7天；

(8)將發(fā)酵好的發(fā)酵液通過(guò)離心分離，收集上層液體；

(9)將收集的液體進(jìn)行低溫濃縮，噴霧干燥，得到高含量的紫杉醇干品。