[發明專利]雜交瘤細胞株及其應用

無效

• 申請號: 201010556627.7
• 申請日: 2010-11-24
• 公開（公告）號: CN102127523A
• 公開（公告）日: 2011-07-20
• 發明（設計）人: 祭芳;史建榮;薛秋燕;林凡云;徐劍宏
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N5/18
• 分類號: C12N5/18;C07K16/18;G01N33/577;C12N15/09;C12P21/08
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 孫忠浩

技術領域

本發明涉及一種雜交瘤細胞株及其應用，該雜交瘤細胞株能夠產生抗伏馬毒素FB1的單克隆抗體，并用于檢測伏馬毒素FB1污染情況。

背景技術

伏馬毒素(Fumonisin，FB)主要是由串珠鐮刀菌產生的真菌毒素。其中FB₁是污染物的主要成分、也是導致毒性作用的主要原因。FB₁廣泛存在于世界范圍的玉米及其制品中，對人類健康和畜牧業發展構成潛在威脅。研究證明FB₁可引起馬的腦白質軟化病(equineleukoencephalomalacia，ELEM)和豬的肺水腫綜合癥(porcinepulmonary?edema，PPE)。流行病學資料顯示，人類膳食中FB₁污染與食管癌高發有一定的關聯。因此建立一種快速、靈敏、簡便的檢測方法成為當務之急。

目前，用于分析食品及飼料中的FB₁的檢測方法較多，有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜一質譜聯用(LC-MS)、氣相色譜(GC)、毛細管電泳法(CZE)等。盡管這些方法具有較高的靈敏度，但樣品的前處理步驟較多，相對費時且費用較高，特別是不適用于大量樣品的篩選。

酶聯免疫檢測方法(ELISA)提供了一種伏馬毒素FB₁的快速、靈敏、簡便的檢測方法。科學家們先后建立了幾種測定FB₁的ELISA檢測方法。1994年，Satoshi?Fukuda，Ayumu?Nagahara，Mamoru?Kikuchi等在Biosci.Biotech.Biochem.發表《Preparation?and?Characterization?ofAnti-Fomonisin?Monoclonal?Antibodies》(Vol.58(4)，765-767)。2000年，Ildiko?Barna-Vetro，Erzsebet?Szabo，bela?Fazekas等在J.Agric.FoodChem.發表《Development?of?a?Sensitive?ELISA?for?the?Determination?ofFumonisin?B₁?in?Cereals》(Vol.48，2821-2825)中以單克隆抗體測定谷?物中的FB1。2003年，M.E.SAVARD，R.C.SINHA，R.LAU，C.SEGUIN等人在Food?and?Agricultural?Immunology發表的《MonoclonalAntibodies?for?Fumonisin?B₁，B₂and?B₃》(Vol.15，127-134)中以單克隆抗體對玉米樣品中FB₁的檢測建立了直接ELISA法。目前我國報道關于FB₁的ELISA檢測方法還很少。

本發明為檢測FB₁，提供一種新的雜交瘤細胞株，能很好地檢測出玉米及其飼料制品中伏馬毒素的污染量，為保障食品的安全和畜牧業的快速健康發展提供了有力的檢測工具和手段。

發明內容

本發明的目的在于：針對目前檢測伏馬毒素FB1存在的問題，提供一種能產生與FB1發生抗原抗體反應的IgM亞型抗體的雜交瘤細胞株及其應用。

本發明的目的是這樣實現的：一種雜交瘤細胞株，其特征在于：在中國典型培養物保藏中心保藏的保藏編號為CCTCC?NO：C201008，保藏時間為2010年4月15日，保藏地址為中國武漢武漢大學。

在本發明中：一種雜交瘤細胞株的制備方法，其特征在于

a)將免疫抗原FB₁-KLH與弗氏完全佐劑等體積混合并充分乳化，腹腔注射每只BALB/C小鼠，每次注射體積為0.2mL，毒素量為40μg，對BALB/C小鼠實施基礎免疫；

b)將免疫抗原與弗氏不完全佐劑等體積混合并充分乳化，每隔兩周腹腔注射進行一次，重復3～4次，每次注射體積為0.2mL，毒素量為40μg；將免疫抗原與濃度為0.9％的生理鹽水混合，在進行細胞融合前3天，經腹腔注射，毒素量為80μg，對BALB/C小鼠實施加強免疫；

c)按常規方法收集免疫小鼠的脾細胞與SP2/0細胞按10∶1的比例以50％的PEG4000進行融合，用HAT培養液選擇培養，融合后10～15d，取上清采用間接ELISA法篩選分泌抗FB₁的雜交瘤細胞株，對所得陽性克隆株采用有限稀釋法進行亞克隆；