[發明專利]雜交瘤細胞株及其應用

無效

• 申請號: 201010556627.7
• 申請日: 2010-11-24
• 公開（公告）號: CN102127523A
• 公開（公告）日: 2011-07-20
• 發明（設計）人: 祭芳;史建榮;薛秋燕;林凡云;徐劍宏
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12N5/18
• 分類號: C12N5/18;C07K16/18;G01N33/577;C12N15/09;C12P21/08
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 孫忠浩

1.一種雜交瘤細胞株，其特征在于其保藏編號為CCTCC?NO：C201008。

2.根據權利要求1所述的雜交瘤細胞株的制備方法，其特征在于按如下步驟獲得

a)將免疫抗原FB₁-KLH與弗氏完全佐劑混合并充分乳化，腹腔注射對BALB/C小鼠實施基礎免疫；

b)收集免疫小鼠的脾細胞與SP2/0細胞進行融合，用HAT培養液選擇培養，融合后10～15d，取上清采用間接ELISA法篩選分泌抗FB₁的雜交瘤細胞株，對所得陽性克隆株采用有限稀釋法進行亞克??；

c)獲得一株能穩定分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞株。

3.一種由權利要求1所述雜交瘤細胞株產生的單克隆抗體，其特征在于所述的單克隆抗體與FB1發生抗原抗體反應，屬IgM亞型的抗體，是由雜交瘤細胞株的培養液中獲得，或用雜交瘤細胞株細胞種植到實驗動物腹腔產生腹水而獲得。

4.根據權利要求3所述的單克隆抗體，其特征在于所述的單克隆抗體重鏈的氨基酸序列為序列表中SEQ?ID?NO.1的氨基酸殘基序列，所述的單克隆抗體輕鏈的氨基酸序列為序列表中SEQ?ID?NO.2的氨基酸殘基序列。

5.根據權利要求3所述的單克隆抗體，其特征在于由雜交瘤細胞株的培養液中獲得是指：將雜交瘤細胞細胞按1×10⁶接種量接種到5mL含20％新生小牛血清的RPMI1640培養基中，在37℃含5％CO₂的細胞培養箱中培養3天，然后將細胞培養液在800rpm下離心10min，收集上清，獲得單克隆抗體；用雜交瘤細胞株細胞種植到實驗動物腹腔產生腹水而獲得是指：選擇健康的BALB/C小鼠，先向小鼠腹腔注射0.5mL降植烷，7-10天后每只小鼠腹腔注射雜交瘤細胞1×10⁶～2×10⁶個，待小鼠腹部明顯膨大到一定程度后，用9號針頭抽取腹水，收取的腹水于4℃、13000rpm離心30min，收集上清，獲得單克隆抗體。

6.一種根據權利要求1所述雜交瘤細胞株的應用，其特征在于，將雜交瘤細胞株產生的單克隆抗體用于檢測伏馬毒素FB1。

7.根據權利要求6所述雜交瘤細胞株的應用，其特征在于將所述的單克隆抗體配置在檢測伏馬毒素FB1免疫試劑盒中。

8.根據權利要求6所述雜交瘤細胞株的應用，其特征在于將所述的單克隆抗體制成用于純化伏馬毒素FB1的膠體金免疫試紙條。

9.根據權利要求6所述雜交瘤細胞株的應用，其特征在于將所述的單克隆抗體制成用于純化伏馬毒素FB1的免疫親和柱。

10.一種根據權利要求1所述雜交瘤細胞株的應用，其特征在于通過把雜交瘤細胞產生的抗體用胰蛋白酶或其類似物經酶處理，或經還原可獲得的抗體片段；通過從雜交瘤細胞中提取mRNA，把從mRNA制備的cDNA插入到原核或真核表達載體中，再將載體導入原核或真核細胞中，然后在其中表達所需的產物也獲得抗體片段。