[發明專利]α-葡萄糖基橙皮苷的制備方法

無效

• 申請號: 201010552224.5
• 申請日: 2010-11-22
• 公開（公告）號: CN102051397A
• 公開（公告）日: 2011-05-11
• 發明（設計）人: 高蘭
• 申請（專利權）人: 成都神農本草生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/60
• 分類號: C12P19/60
• 代理公司: 成都信博專利代理有限責任公司 51200
• 代理人: 舒啟龍

技術領域

本發明涉及一種改性橙皮苷的制備方法，具體來說是α-葡萄糖基橙皮苷的制備方法。?

背景技術

橙皮苷是柑橘60種黃酮類化合物中重要的一種，主要分布在柑橘類植物中，常存在于甜橙、酸橙、檸檬、寬皮橘、葡萄柚及柑橘等蕓香科植物中。橙皮苷是一種二氫黃酮，熔點245～254℃，呈弱酸性，難溶于水，幾乎不溶于丙酮、苯、三氯甲烷、易溶于稀堿溶液。橙皮苷可抗氧化，可完全抑制脂質過氧化物的形成，對羥自由基有明顯清除作用，具有抗癌，抗病毒，抗細菌作用，對食品的常見的污染菌有廣譜抑菌作用，還具有強化毛細血管，預防毛細血管出血的作用，是高血壓和動脈硬化所致的血管疾病有效的治療劑和預防劑。?

橙皮苷的結構式：?

目前，橙皮苷在醫藥、食品及日用化工有一定應用。但是由于其水溶性和脂溶性較差，影響橙皮苷在體內的代謝，其應用受到限制。通過橙皮苷的改性，其水溶性，吸收性，以及藥物療效都有一些改善。?

欲改善橙皮苷的化學特性，目前有以下幾種方法：?

1、橙皮苷的甲基化：甲基橙皮苷溶于水，具有與橙皮苷同樣的藥理作用，還增加了改善膚色等功效，但有實驗顯示，甲基橙皮苷對.OH的清除作用小于橙皮苷，抗氧化能力有所減弱。?

、橙皮苷酶催化水解和高溫下酸催化水解：得到同一種物質橙皮素單糖苷，?是一種甜味劑的前體，具有較強的的抗感冒病毒活性，但采用游離橙皮苷酶制備橙皮素單糖苷時，酶的回收困難，成本較高。用酸催化水解法制備橙皮素單糖苷，雖然成品較低，但純化分離較為復雜，且易污染環境。?

3、橙皮苷的磺化：橙皮苷的磺化的方法值得橙皮苷磺化產物為五種橙皮苷磺酸鈉的混合物，通過磺化反應，提高其水溶性，但對磺化橙皮苷的其他功能未作評價，有待于進一步研究。?

發明內容

本發明的目的是提供一種α-葡萄糖基橙皮苷的制備方法，以通過酶法改善橙皮苷的化學特性。?

本發明的目的是這樣實現的：一種α-葡萄糖基橙皮苷的制備方法，包括以下步驟：?

a)、酶轉化反應：?

以橙皮苷和糊精為原料，在α-葡萄糖基轉移酶作用下發生α-葡萄糖基化反應，生成α-葡萄糖基橙皮苷；?

b)、樹脂吸附提純：?

a步反應結束后，將反應混合液加熱至80°使酶失活，放置過夜后過濾取上層清液，將清液過HP-10大孔樹脂柱以除去糖和無機鹽；?

c)、脫色工序：?

將b步經大孔樹脂柱處理后的清液進行活性炭脫色處理；?

d)、濃縮結晶工序：?

經c步活性炭脫色后液體再經濃縮結晶處理，得到目標產物。?

上述a步酶轉化反應時PH值控制在6～8，反應溫度控制在50～60℃，α-葡萄糖基轉移酶的加入量控制在600～1200IU/g，反應時間為24小時。?

上述a步酶轉化反應時PH值控制在7，反應溫度控制在55℃，α-葡萄糖基轉移酶的加入量控制在800IU/g。?

上述糊精是DE值4-20的糊精或以淀粉為原料經酶處理得到的粗糊精。?

上述a步酶轉化反應期間采用液相色譜儀跟蹤反應完全程度。?

本發明提供的α-葡萄糖基橙皮苷，其化學結構式為：?

α-葡萄糖基轉移酶是一種具有催化功能的多糖類合成酶，主要是從嗜熱脂肪芽孢桿菌、嗜堿脂肪芽孢桿菌、軟化芽孢桿菌等微生物中分離得到的。?

橙皮苷轉化反應成α-葡萄糖基橙皮苷后，理化性質和生理功能更加優越，可以直接用于醫藥、食品、飼料、日化等行業，也可以將粗品進一步提純。提純方法可以是重結晶、柱層析、大孔吸附樹脂等，優選采用HP-10型大孔吸附樹脂，先用水沖洗去無機鹽、糖等水溶性成分，再用乙醇/水混合溶劑沖洗出產品，70％乙醇可沖出α-葡萄糖基橙皮苷。產物經濃縮、脫色、結晶等工藝獲得白色粉末。?

酶轉化產物經上述工藝提純后，采用HPLC檢測產物的含量。?

HPLC檢測條件如下：?

柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；?

流動相：V(乙腈)∶V(4％的醋酸溶液)＝60∶40；?

流速：1.3ml/min；?

檢測波長：287nm；?

柱溫：40℃；?

進樣量：10μl。?

本發明的有益效果是：本發明制備方法路線簡單、反應條件溫和、產率高。?

具體實施方式