[發明專利]一株斜臥青霉及其培養方法與在轉化甾體藥物中的應用

有效

• 申請號: 201010548386.1
• 申請日: 2010-11-17
• 公開（公告）號: CN102127511A
• 公開（公告）日: 2011-07-20
• 發明（設計）人: 劉新利;趙林;劉佩卉;張妍妍
• 申請（專利權）人: 山東輕工業學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P15/00;C12R1/80
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 趙會祥

1.一株斜臥青霉(Penicillium?decumbens)UC086菌株，該菌株在2010年8月9日保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏號：CGMCC?4075。

2.權利要求1所述菌株斜臥青霉(Penicillium?decumbens)UC086的培養方法，步驟如下：

(1)取菌種保藏號為CGMCC?4075的斜臥青霉UC086接種于活化培養基，培養條件：溫度27～29℃，搖床轉速120～200r/min，培養1～2天，得活化后的斜臥青霉UC086；

(2)取活化后的斜臥青霉UC086接種于種子培養基中，于25～35℃、100～300r/min的培養條件下培養2～4天，過濾，即得。

3.如權利要求2所述的培養方法，其特征在于，所述步驟(1)中的活化培養基組分如下：去皮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000mL，pH值自然。

4.如權利要求2所述的培養方法，其特征在于，所述步驟(2)中的種子培養基組分如下：碳源1～5g/L，氮源1～5g/L，無機鹽0.01～2g/L；碳源選自葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉之一；氮源選自酵母浸粉、蛋白胨、胰蛋白胨、牛肉膏、玉米漿、硝酸鈉、硫酸銨之一；無機鹽選自硫酸鎂、硫酸亞鐵、磷酸氫二鉀、氯化鈣、硫酸鋅、硫酸銅、硫酸錳之一；pH?5.0～9.0；優選的，種子培養基組分如下：葡萄糖3～5g/L，酵母浸粉3-5g/L，硫酸鎂為0.1～1g/L。

5.如權利要求2所述的培養方法，其特征在于，所述步驟(2)中種子培養基的接種量為5×10⁶～1×10⁸個/mL。

6.權利要求1所述斜臥青霉(Penicillium?decumbens)UC086在利用去氫表雄酮生產1α-羥基去氫表雄酮方面的應用。

7.如權利要求6所述的應用，其特征在于，步驟如下：

(1)取經培養后的斜臥青霉UC086，接入生物轉化培養基，培養1～2天，然后向生物轉化培養基中添加底物溶液，使培養基中去氫表雄酮終濃度達到0.2～2g/L，25～35℃、100～300r/min培養3～5天，得誘導培養液；

(2)將步驟(1)制得的誘導培養液與有機溶劑混合萃取30～60min，將萃取物加入柱層析硅膠進行吸附，干法上樣，柱層析分離，收集組分進行TLC檢測，目標組分濃縮，再進行1～3次柱層析分離，目標組分濃縮即得1α-羥基去氫表雄酮。

8.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述步驟(1)中的生物轉化培養基中，碳源選自葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、可溶性淀粉、乳糖、檸檬酸之一，添加量為1～5g/L；氮源選自蛋白胨、胰蛋白胨、酵母膏、玉米漿、硫酸銨、硝酸鈉之一，添加量為1～5g/L；無機鹽選自硫酸亞鐵、硫酸鋅、硫酸銅、氯化鉀、硫酸鎂、氯化鈣、硫酸錳之一，添加量為0.0001～2g/L，pH?5.0～9.0；優選的，上述生物轉化培養基組分如下：蔗糖為3～5g/L，硝酸鈉為3～5g/L，硫酸鎂為0.1～1g/L，硫酸錳為0.0001～0.01g/L，硫酸亞鐵為0.0001～0.01g/L。

9.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述步驟(1)中的底物溶液通過如下步驟配制：

用溶劑溶解去氫表雄酮，按每克去氫表雄酮溶解于10～20毫升溶劑計；優選的，溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、環糊精之一。

10.如權利要求7所述的應用，其特征在于，所述步驟(2)中的機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷、丙酮；柱層析分離采用200～300目硅膠H進行柱層析分離，洗脫劑由乙酸乙酯和乙醚按體積比15～25∶1配制而成。