[發明專利]針對人腸道病毒71型的重組廣譜性疫苗

有效

• 申請號: 201010548081.0
• 申請日: 2010-11-17
• 公開（公告）號: CN102464721A
• 公開（公告）日: 2012-05-23
• 發明（設計）人: 黃忠;王波
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海巴斯德研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K39/295;C12N15/62;C12N15/63;C12P21/02;A61P31/14
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

技術領域

本發明屬于生物醫學和生物技術領域；更具體地，本發明涉及針對人腸道病毒71型的重組廣譜性疫苗。

背景技術

手足口病(Hand，foot?and?mouth?disease，HFMD)是由腸道病毒引起的一種急性傳染病，主要通過密切接觸或消化道傳播，多發生于10歲以下的嬰幼兒，以手、足、口腔等部位皮膚粘膜的皮疹、皰疹、潰瘍為典型表現，病情嚴重的患者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎、小兒麻痹等并發癥。該病傳染性強，死亡率高，易引起暴發或流行。過去的幾年，手足口病在遠東地區的很多國家和地區流行，包括中國、香港、日本、新加坡和臺灣。在今年的一月一日到九月三十日期間，中國報道了1,567,254例手足口病，其中829例死亡。

人腸道病毒71型(Enterovirus?71，EV71)是引起手足口病的主要病原體之一，該病毒屬于小RNA病毒科(Picornaviridae)腸道病毒屬(Enterovirus)，是單鏈正義RNA病毒，基因組約7400bp(參見Xu，J.，Y.Qian，S.Wang，J.M.Serrano，W.Li，Z.Huang，and?S.Lu.2010.EV71：an?emerging?infectious?disease?vaccine?target?in?the?Far?East?Vaccine?28：3516-21.11.Zhang，Y.，D.Wang，D.Yan，S.Zhu，J.Liu，H.Wang，S.Zhao，D.Yu，L.Nan，J.；An，L.Chen，H.An，A.Xu，and?W.Xu.2010.Molecular?evidence?of?persistent?epidemic?and?evolution?of?subgenotype?B1?coxsackievirus?A16-associated?hand，foot，and?mouth?disease?in?China.J?Clin?Microbiol?48：619-22)，編碼單股長鏈多肽，由結構蛋白P1和非結構蛋白P2、P3組成。病毒蛋白酶將P1切割為VP0、VP1和VP3，三者組裝形成病毒衣殼(Ranganathan，S.，S.Singh，C.L.Poh，and?V.T.Chow.2002.The?hand，foot?and?mouth?disease?virus?capsid：sequence?analysis?and?prediction?of?antigenic?sites?from?homology?modelling.Appl?Bioinformatics?1：43-52)。

目前臨床上尚無針對EV71的疫苗。VP1是EV71的主要保護抗原，能夠誘導中和抗體并對病毒攻擊有保護作用。VP1上的含15個氨基酸的線性肽段SP55和SP70在EV71不同亞型間高度保守，用SP55或SP70多肽免疫小鼠后可誘導機體產生廣譜中和抗體。但是，SP55和SP70多肽本身的免疫原性較弱，需要大劑量免疫才能誘導出理想的免疫效果，而且合成多肽的成本很高，其本身不適合直接作為疫苗使用。

因此，還需要進一步開發針對EV71的免疫原性高、免疫效果好的疫苗，并降低疫苗制備的成本。

發明內容

本發明的目的在于表達展示SP55或SP70的嵌合病毒樣顆粒，以期提高SP55和SP70誘導中和抗體的能力，構建新型EV71重組廣譜性疫苗。

本發明的另一目的在于提供一種針對人腸道病毒71型的重組廣譜性疫苗。

在本發明的第一方面，提供一種融合蛋白，包含以下的蛋白：

至少1個拷貝的(1-10個拷貝；如8，5，3，2個拷貝)人腸道病毒71型VP1蛋白的肽段SP55和/或SP70；和

乙肝核心抗原(HBcAg)。

在一個優選例中，所述的人腸道病毒71型VP1蛋白的肽段SP55和/或SP70與乙肝核心抗原之間，通過化學鍵相連或相互偶聯(較佳地通過化學鍵相連)；所述的化學鍵是共價鍵或非共價鍵。

在另一優選例中，所述的化學鍵是肽鍵。

在另一優選例中，所述的肽段SP55的序列如SEQ?ID?NO：2。

在另一優選例中，所述的肽段SP70的序列如SEQ?ID?NO：3。

在另一優選例中，所述的融合蛋白帶有或不帶有純化標簽，如6×His。

在另一優選例中，所述的至少1個拷貝的人腸道病毒71型VP1蛋白的肽段SP55和/或SP70插入在乙肝核心抗原氨基酸序列76-84位之間的任意兩個氨基酸之間；或