[發明專利]一種溶菌酶及其制備和應用

無效

• 申請號: 201010544907.6
• 申請日: 2010-11-05
• 公開（公告）號: CN102061291A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發明（設計）人: 孫黎;趙璐
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C12N9/36
• 分類號: C12N9/36;C12N1/16;A61K38/47;A61P31/02;A61P31/04;A61P31/10;A01N47/44;A01P1/00
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 許宗富;周秀梅

1.一種溶菌酶，其特征在于：溶菌酶為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示。

2.一種權利要求1所述的溶菌酶的制備，其特征在于：

1)質粒pLysG的構建：

以大菱鲆cDNA為模板，用引物F1和R1進行PCR擴增。PCR產物純化后與載體pBS-T于室溫連接2-8小時，連接混合液轉化大腸桿菌，篩選轉化子提取質粒，即為質粒pBLysG

將上述質粒pBLysG和質粒pPIC9H分別用限制性內切酶EcoRV和SnaBI酶切，回收0.58kb和9.2kb片段，將這二片段用T4DNA連接酶連接，連接液轉化入大腸桿菌，篩選轉化子提取質粒，即為質粒pLysG；

2)溶菌酶的表達和制備

將上述步驟1)的質粒pLysG轉化入酵母GS115內，在含有安卡青霉素的LB培養基上培養，篩選轉化子即為GS115/pLysG；

將轉化子GS115/pLysG進行誘導表達后，收集上清，將上清用UltraCentrifugal?Filter?Devices濃縮20-25倍后，濃縮后的上清即為序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列所示的溶菌酶。

3.按權利要求2所述的溶菌酶的制備，其特征在于：所述步驟1)中F1為5’-GATATCATGGGTTATGCAAATATCAAGG-3’；R1為5’-GATATCAAACCCATTCCTTTTGTACCA-3’。

4.一種權利要求1所述的溶菌酶的應用，其特征在于：所述序列表SEQ?ID?No.1中的氨基酸序列的溶菌酶可作為抑菌劑。

5.按權利要求4所述的溶菌酶的應用，其特征在于：所述溶菌酶可作為革蘭氏陽性或革蘭氏陰性菌的抑菌劑。

6.按權利要求5所述的溶菌酶的應用，其特征在于：所述溶菌酶可作為哈氏弧菌、海豚鏈球菌、創傷弧菌或副溶血弧菌的抑菌劑。