[發明專利]高效表達類胰島素生長因子IGF-1的乳腺特異性表達載體

無效

• 申請號: 201010544656.1
• 申請日: 2010-11-16
• 公開（公告）號: CN102041271A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: 楊倩;林建;庾慶華;張強
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/12;C12N15/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種高效表達類胰島素生長因子IGF-1的乳腺特異性表達載體，其igf-1基因具有如SEQ?ID?NO.1所示的序列，其構建方法包括：

1)薩能奶山羊類胰島素生長因子基因igf-1的克隆

參照NCBI上genebank登錄號：D11378的山羊IGF-1mRNA全序列引物設計如下：

上游引物：5’-ACAGGTACCATGGGAAAAATCAGCAGTCT-3’

下游引物：5’-CGCAAGCTTCTACATTCTGTAGTTCTTGT-3’

以薩能奶山羊肝臟組織提取的總RNA為模板，經M-MLV反轉錄酶合成cDNA第一鏈后進行PCR擴增；反應條件為：94℃預變性5min；94℃變性30s，57℃復性30s，72℃延伸45s，30個循環后；72℃延伸10min；將PCR克隆至pMD19-T載體，測序后獲得具有完整編碼區的薩能奶山羊類胰島素生長因子基因igf-1的cDNA序列SEQID?NO.1；

2)乳腺特異性表達載體的構建

根據骨架載體pBC1和SEQ?ID?NO.1序列，設計特異性引物：

上游引物：5’-ATCGCGGATCCTCGAGATGGGAAAAATCAG-3’

下游引物：5’-GGTCCGGATCCTCGAGGAGCTCCTACATTCTGTAG-3’

以步驟1)中獲得的PCR擴增產物為模板，經PCR擴增將獲得的igf-1序列克隆至pBC1載體上，獲得載體pI；進一步將篩選標記基因neo克隆到載體pI上獲得乳腺特異性表達載體pIN。