[發(fā)明專(zhuān)利]氨(氨離子)的測(cè)定方法與氨(氨離子)診斷/測(cè)定試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010537682.1
• 申請(qǐng)日: 2010-11-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102466721A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-05-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/52
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/52;G01N21/31;G01N21/33;C12Q1/26;C12Q1/25
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)/食品檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及氨(氨離子)診斷/測(cè)定方法及其試劑盒。?

【背景技術(shù)】

氨測(cè)定的方法有微量擴(kuò)散法、離子交換法、酶法和氨電極法等。目前應(yīng)用最多的方法是酶法和基于離子選擇電極的血氨測(cè)定儀分析法。?

擴(kuò)散法是標(biāo)本堿化后，釋放出NH₃，用酸滴定釋放出的氨，或用Nessler反應(yīng)形成棕黃色碘化雙汞胺進(jìn)行比色。這些方法需要堿化，內(nèi)源性的氨形成造成影響，使其準(zhǔn)確性和精密度受到影響，目前已很少應(yīng)用；離子交換法比擴(kuò)散法更準(zhǔn)確，CV為8％～13％；離子選擇電極法是利用NH₃擴(kuò)散到電極表面，引起電極的pH發(fā)生變化進(jìn)行測(cè)定，該方法的CV為3.5％～4.8％，回收率高。結(jié)合具體實(shí)際，應(yīng)以酶法測(cè)定為實(shí)用。?

檢索中國(guó)專(zhuān)利，僅查出87105593.7專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)了一種血氨測(cè)定速凍杯，卻未發(fā)現(xiàn)比較理想的血氨測(cè)定方法。?

【發(fā)明內(nèi)容】

[要解決的技術(shù)問(wèn)題]?

本發(fā)明的目的是提供一種氨(氨離子)的測(cè)定方法。?

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種氨(氨離子)診斷/測(cè)定試劑盒。?

[技術(shù)方案]?

本發(fā)明是通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。?

本發(fā)明的方法是一種采用酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)與酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)的聯(lián)用技術(shù)，利用測(cè)定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長(zhǎng)處的吸光度變化測(cè)定氨(氨離子)的方法。?

本發(fā)明氨(氨離子)測(cè)定方法的的技術(shù)原理是根據(jù)下述谷氨酸氧化酶、氨甲酰磷酸合成酶、谷氨酸合成酶的系列催化反應(yīng)完成：?

氨+過(guò)氧化氫+2-酮戊二酸谷氨酸氧化酶谷氨酸+氧+水?

谷氨酸+2腺苷二磷酸+磷酸根+氨甲酰磷酸氨甲酰磷酸合成酶

???????????????????2腺苷三磷酸+谷氨酰胺+二氧化碳+水?

谷氨酰胺+2-酮戊二酸+還原型輔酶谷氨酸合成酶谷氨酸+輔酶?

本發(fā)明的方法利用谷氨酸氧化酶(Glutamate?oxidase；EC?1.4.3.7、EC?1.4.3.11)酶(偶)聯(lián)氨甲酰磷酸合成酶(carbamyl?phosphate?synthetase；EC?6.3.5.5)、谷氨酸合成酶(glutamate?synthase；EC?1.4.1.13)酶促反應(yīng)比色終點(diǎn)法。谷氨酸氧化酶酶解氨反應(yīng)產(chǎn)生谷氨酸，再通過(guò)(偶)聯(lián)合氨甲酰磷酸合成酶、谷氨酸合成酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒(méi)有吸收峰)，從而得以測(cè)定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度，這樣可以通過(guò)測(cè)量340nm處吸光度下降的程度，可以測(cè)算氨(氨離子)的濃度大小。?

本發(fā)明是通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。?

本發(fā)明涉及一種氨(氨離子)的測(cè)定方法。該氨(氨離子)測(cè)定方法的步驟如下：?

A、樣品準(zhǔn)備：?

A.1標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備?

將一定量的氨鹽溶于水或緩沖液中，再將氨濃度調(diào)整到100微摩爾/升，得到的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)樣品；

A.2待測(cè)樣品的制備?

待測(cè)液體樣品直接測(cè)試，無(wú)須預(yù)處理；將一定量的待測(cè)固體樣品像制備標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣溶于水或緩沖液中；?

A.3空白樣品?

所述的水或緩沖液作為空白樣品，其氨(氨離子)濃度為0微摩爾/升；?

B、試劑溶液的制備：?

分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、谷氨酸氧化酶、氨甲酰磷酸合成酶、谷氨酸合成酶、過(guò)氧化氫、2-酮戊二酸、腺苷二磷酸、單價(jià)磷酸鹽與氨甲酰磷酸，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的濃度分別是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-0.35mmol/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1000-80000U/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L、1-100mmol/L與1-100mmol/L；?