[發明專利]普那霉素的制備方法

有效

• 申請號: 201010537031.2
• 申請日: 2010-11-10
• 公開（公告）號: CN102465164A
• 公開（公告）日: 2012-05-23
• 發明（設計）人: 王健;張雪霞;李曉露;蔣沁;李寧;林毅;王海燕;張金娟;林旸;張麗;王秀捧;陳書紅
• 申請（專利權）人: 華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于工業微生物技術領域，涉及藥品原料的制備方法，具體地說是屬于普那霉素制備方法。

背景技術

普那霉素屬鏈陽性菌素類抗生素，系始旋鏈霉菌(Streptomyces?pristinaespiralis)產生，由普那霉素I(PI_A，PI_B，PI_C)和普那霉素II(PII_A，PII_B)組成，兩者的組合比例大約是由約30％的普那霉素I(PI)和約70％的普那霉素II(PII)，普那霉素I為環六肽內酯，普那霉素II為多不飽和環內酯，其中PI_A和PII_A是普那霉素的主要組分。化學結構式如下：

此產品外觀為非結晶結構的淡黃色粉末狀物質，其熔點為151-153℃。普那霉素在0.5mol/L甲醇中的旋光度為[a]_D²⁵＝-130°，在1mol/L三氯甲烷中的旋光度為[a]_D²⁵＝-150°。普那霉素能溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙脂以及三氯甲烷，微溶于水，難溶于石油醚。它在Tollens試劑、Millon試劑、Seliwanoff試劑、Fehling試劑以及在水合荀三酮中反應時能發生氧化反應，而在氯化鐵溶液、Ehrlich試劑和Folin-Denis試劑中反應時卻發生還原反應。

普那霉素是由法國安萬特公司開發生產，世界范圍內只有安萬特公司生產，普那霉素作為抗葡萄球菌口服制劑已經在法國應用了20多年，然而對普那霉素耐藥的葡萄球菌、腸球菌卻少于5％，到目前為止，還沒有發現革蘭氏陽性球菌對普那霉素耐藥的報道。普那霉素作為一種萬古霉素替代藥物，是目前治療由耐藥的革蘭氏陽性菌引起的感染的最有效的抗生素之一。

現有的技術當中，美國專利US3154475(1964)和英國專利GB998195(1965)中描述了普那霉素的傳統提取方法。發酵液調pH至3，過濾分離得到濾液，用稀堿調濾液PH至7，然后用有機溶劑二氯甲烷直接萃取濾液，得到含有目的物的萃取液，真空濃縮，用石油醚處理即得到普那霉素粗品，粗品用二氯甲烷溶解，上粉末狀活性炭柱層析，二氯甲烷洗脫，收集中央部分，石油醚處理得到沉淀，洗滌干燥后得到純品，提取總收率約50％。該提取方法存在很多缺點(1)過濾時間長，濾液渾濁，過濾收率低；(2)用有機溶劑直接去萃取濾液，溶劑消耗量大，且乳化嚴重，不利于操作，設備利用率低。(3)濃縮量大，能耗高。(4)工序復雜，處理周期長，過程損失大，總收率低，成本偏高，不適用規模化生產。

發明內容

本發明的目的在于克服上述不足之處，研究設計一種制備普那霉素的新方法，該方法可有效從普那霉素發酵液中分離純化得到普那霉素，該制備方法工序簡單、易操作、溶劑消耗少、易回收、成本低，適用于工業化生產。

下面對本發明進行具體描述：

本發明的目的是這樣實現的：將普那霉素發酵液酸化，加入助濾劑，攪拌均勻，過濾，脫色，吸附、解析、脫色、濃縮、溶劑萃取、結晶，重結晶，干燥得到普那霉素純品。

具體地，本發明涉及一種普那霉素的制備方法，包括下述步驟：

1)在常溫條件下將普那霉素發酵液加入酸性物質調節pH值至3.0-4.0，然后加入助濾劑，攪拌50分鐘-1.5小時至助濾劑分散均勻，過濾；

2)濾液使用大孔脫色樹脂脫色；

3)脫色液導入大孔樹脂進行吸附和解吸；

4)解吸液中加入一定量的粉末狀活性炭攪拌脫色30分鐘-90分鐘；

5)濃縮、萃取、堿洗；

6)結晶，固液分離普那霉素結晶液得到普那霉素粗品；

7)粗品重結晶；

其中，步驟1)中調節發酵液pH值所用的酸類為鹽酸、硫酸或有機酸，優選為鹽酸；調發酵液PH值至3.0-4.0，優選pH值為3.5-3.8；助濾劑為珍珠巖或硅藻土，優選為珍珠巖；助濾劑用量為發酵液體積的1％-5％(w/v)，優選為2％-4％；攪拌時間為50分鐘-1.5小時；過濾時可以采用傳統的板框過濾，也可以采用比較先進的膜過濾技術，優選設備占地面積小、勞動強度小、收率高、濾液質量好的陶瓷膜過濾技術。

步驟2)中的大孔脫色樹脂為D301、D330、D311、D293、D315樹脂，優選為D293樹脂。