[發明專利]一種血清鐵含量的檢測方法及其專用標準品

有效

• 申請號: 201010532904.0
• 申請日: 2010-11-02
• 公開（公告）號: CN102053068A
• 公開（公告）日: 2011-05-11
• 發明（設計）人: 王清濤;黃妍;馬懷安;徐靜;張建平
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京朝陽醫院
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/38
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種血清鐵含量的檢測方法及其專用標準品。

背景技術

鐵是人體正常生理過程中不可缺少的物質，幾乎任何組織都含有鐵。缺鐵性貧血是鐵缺乏最嚴重的疾病，血清鐵的檢測在臨床診斷過程起著重要的作用。早在1966年，國際血液學標準化委員會(International?Committee?of?Standardization?inHaematology?ICSH)開始推進血清鐵檢測的標準化進程，1970年8月在慕尼黑ICSH第8次會議上達成一致，隨后發表了血清鐵的推薦方法，推薦一種使用Bathophenanthroline?sulfonate為色原的參考方法，三氯乙酸為蛋白沉淀劑，鐵的標準濃度為2mg/L，分光光度計上在535nm波長比色。1978年ICSH對其進行了改進，蛋白沉淀的鹽酸濃度由1971年提出的2mol/L降低為lmol/L，避免沉淀上清發生渾濁的情況發生。大量的實驗發現，相對于色原Bathophenanthroline?sulfonate來說，亞鐵嗪(Ferrozine)靈敏度高25％，Ferene靈敏度高50％。1990年ICSH推薦使用亞鐵嗪或Ferene做為色原，亞鐵嗪使用562nm波長下比色，Ferene使用593nm波長比色。

美國臨床和實驗室標準協會(clinical?and?laboratory?standards?instituet，CLSI))在1990年提出了使用亞鐵嗪為色原的分光光度法做為推薦標準方法，1998年確認將其做為標準方法。CLSI的標準方法與ICSH參考方法相同點是使用了相同的色原亞鐵嗪，兩個機構的方法均設置了蛋白沉淀的步驟。CLSI參考方法試劑組成與ICSH參考方法比較，增加了兩個主要成分。其一是硫脲，作用是去除銅的干擾，其二是抗壞血酸，用于去除血紅蛋白的干擾。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種血清鐵含量的檢測方法。

本發明提供的方法，包括如下步驟：

1)A、通過稱量質量的方法得到所需質量的標準品溶液和所需質量的蛋白沉淀試劑，將所需質量的標準品溶液與所需質量的蛋白沉淀試劑混勻，放置；離心，收集上清液，記作上清液I；

B、通過稱量質量的方法得到所需質量的上清液I和所需質量的色原試劑，將所需質量的上清液I與所需質量的色原試劑混勻，離心，取上清液，記作上清液II；

C、在562nm波長下檢測上清液II的吸光度值；

D、以標準品溶液的濃度值為橫坐標，以對應的吸光度值為縱坐標，建立一元線性回歸曲線，即得到標準曲線；

2)通過稱量質量的方法得到所需質量的待測樣品，用所需質量的待測樣品替換步驟1)中的標準品溶液，按照步驟1)中A-C的方法進行檢測，得到待測樣品對應的吸光度值；根據所述標準曲線，得到待測樣品中鐵的含量。

所述標準品溶液的按照如下方法制備：

1)通過稱量質量的方法得到所需質量的鐵和所需質量的水，將所需質量的鐵用濃鹽酸溶解后，加入所需質量的水，得到高濃度鐵標準貯備液，所述鐵離子在所述高濃度鐵標準貯備液中濃度為1.0000mg/g；

2)通過稱量質量的方法得到所需質量的步驟1)得到的高濃度鐵標準貯備液和所需質量的濃度為0.1mol/L的鹽酸水溶液，將所需質量的步驟1)得到的高濃度鐵標準貯備液和所需質量的濃度為0.1mol/L的鹽酸水溶液混合，得到中濃度鐵標準貯備液，所述鐵離子在所述中濃度鐵標準貯備液中的濃度為50.0000μg/g；

3)通過稱量質量的方法得到所需質量的步驟2)得到的中濃度鐵標準貯備液和所需質量的濃度為0.1mol/L的鹽酸水溶液，用所需質量的濃度為0.1mol/L的鹽酸水溶液稀釋所需質量的步驟2)得到的中濃度鐵標準貯備液，得到標準品溶液；所述鐵離子在所述標準溶液中的濃度為以下6種：0.2500ug/g、0.5000ug/g、1.0000ug/g、1.5000ug/g、2.0000ug/g和3.000ug/g。

所述步驟1)的步驟A中，標準品溶液的量為2.00±0.01g，所述蛋白沉淀試劑的量為2.08±0.01g；

所述步驟1)的步驟B中，上清液I的量為2.04±0.01g，所述色原試劑的量為1.14±0.01g；

所述步驟2)中，所述待測樣品的量為2.02±0.01g；

所述步驟1)的步驟A中，所述放置的時間為15min，

所述離心力為1500g，所述離心的時間為15min；

所述步驟1)的步驟B中，所述離心力為1500g，

所述離心的時間為10min。