[發明專利]禽流感病毒H9亞型陽性血清和陰性血清標準物質及制備方法

有效

• 申請號: 201010532340.0
• 申請日: 2010-11-05
• 公開（公告）號: CN102012433A
• 公開（公告）日: 2011-04-13
• 發明（設計）人: 孫建宏;劉景利;胡井雷;張從祿;戴志紅;韓正博;徐姍姍;田國彬
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96;G01N33/531;C07K16/10;C07K16/06
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所 11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明涉及一種禽流感病毒H9亞型陽性血清合陰性血清標準物質及制備方法，屬于獸用生物制品領域。

背景技術

英國藥典(BP)的化學對照物質是從1963年才開始提出，由于WHO在英國建立了國際生物標準物質中心，所以英國一直沿用國際標準物質，而其本國標準物質建立較晚，至1970年后，歐洲藥典問世，英國除引用國際標準物質外，也用歐洲藥典標準物質，少量使用本國的標準物質。即使如此，BP1968年版及其增補本再加英國藥典(1968年)收載的數量已超過260個，1980年版已超過300個，BP1993版收載了371個。美國藥典委員會可提供約1805多種藥品標準物質；歐洲藥典委員會有2098種，其中生物制品標準物質有319種。

目前，我國已研制出國家一級標準物質1262種，二級標準物質1739種，涉及鋼鐵、地質、石油、核材料、環境、食品以及臨床檢驗等領域。獸用生物制品的標準物質研究較滯后，目前只有192種，而獸用生物制品檢驗用標準物質幾乎為零。

獸用生物制品標準物質是控制和確定獸用生物制品產品質量、校準驗證檢驗儀器和方法是否準確的物質標準，是正確診斷傳染病、準確監測免疫情況的物質基礎。

禽流感(AI)是我國重點防控的重大動物疫病，禽流感病毒(AIV)H9亞型流行很廣泛。目前禽流感診斷、免疫監測及其疫苗免疫效果評價中應用最廣泛的方法是HI試驗，這是2006年我國農業部批準通過的方法，但是目前我國尚無禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗用標準物質及其相關研究的報道，國外國際動物衛生組織(OIE)等參考實驗室也沒有，嚴重影響了前后不同時期檢測數據的一致性和不同實驗室數據的可比性。近年各級實驗室對禽流感標準物質的需求越來越多，特別是H9亞型和H5亞型相關的診斷試劑標準物質，因此研制禽流感病毒H9亞型血凝抑制抗原標準物質尤為迫切，該標準物質是禽流感H9亞型準確診斷、免疫監測及對其疫苗免疫效果進行正確評價的根本保障，提高禽流感的防控水平。

目前我國標準物質的研制主要參考和遵循1987年7月10日國家計量局發布實施的《標準物質管理辦法》以及一級標準物質技術規范(JJG?1006-94)，但是這個技術規范是適用于化學成分、物理化學特性及工程技術特性一級標準物質的研制，對于生物制品標準物質，特別是獸用生物制品標準物質研制目前尚無技術規范可循。因此獸用生物制品標準物質研制是一項無基礎的研究，填補了該項研究領域的空白。

發明內容

本發明涉及禽流感病毒H9亞型陽性血清和陰性血清標準物質及制備方法。本標準物質的陽性血清標準物質有強陽性血清標準物質和弱陽性血清標準物質，此兩種陽性血清標準物質只與禽流感病毒H9亞型抗原呈陽性反應，其HI分別為≥7log2和4log2～5log2；此兩種陽性血清與H7和H5亞型禽流感、雞新城疫、減蛋綜合征病毒抗原均應為陰性反應；陰性血清標準物質在同一條件下，分別與禽流感、雞新城疫、減蛋綜合征病毒抗原進行紅細胞凝集抑制試驗，血清對禽流感H5、H7、H9亞型、雞新城疫、減蛋綜合征病毒抗原均為陰性反應。

其制備方法主要為：(1)按常規方法用禽流感病毒H9亞型CKSH01株病毒制備的油乳劑滅活疫苗；(2)陽性血清標準物質候選物系用青年或成年SPF雞，經肌肉注射禽流感病毒H9亞型油乳劑滅活疫苗，制備強陽性血清候選物需經2次免疫，制備弱陽性血清候選物僅1次免疫，選取HI抗體效價≥8log2和5log2的免疫雞只，分別采集SPF雞血清并進行半成品檢驗，并分別加入適宜穩定劑后凍干；(3)陰性血清系采自SPF雞血，分離血清并進行半成品檢驗，凍干；(4)以上制備的強陽性血清、弱陽性血清和陰性血清標準物質候選物經檢驗、均一性檢驗及穩定性檢驗及標準物質的標定、定值而成為強陽性血清、弱陽性血清和陰性血清標準物質。

本發明的技術方案：

一、禽流感病毒H9亞型陽性血清、弱陽性血清和陰性血清標準物質的制備

1.免疫用疫苗的制備

(1)病毒液的制備及檢驗用禽流感病毒H9亞型CKSH01株病毒(由中國國家禽流感參考實驗室(中國哈爾濱市中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所內)鑒定、保管和供應)按照常規方法制備病毒液，并對病毒液進行檢驗：

1)無菌檢驗每瓶雞胚液分別取樣，按《中華人民共和國獸藥典》(中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二○○五年版三部.中國農業出版社，2006，本發明以下簡稱《中國獸藥典》)規定的方法進行檢驗，應無細菌或霉菌或支原體生長也無外源病毒。