[發明專利]一種用百草枯篩選轉基因植物的方法

有效

• 申請號: 201010530688.6
• 申請日: 2010-10-29
• 公開（公告）號: CN102061308A
• 公開（公告）日: 2011-05-18
• 發明（設計）人: 夏勉;喬琳;王麗英;孔祥鳳;劉軍華;李毅
• 申請（專利權）人: 北京未名凱拓作物設計中心有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/29;C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 北京君尚知識產權代理事務所(普通合伙) 11200
• 代理人: 董琍雯

1.一種用于百草枯抗性的轉基因植物的規模化篩選的雙蛋白表達的表達盒，其依次包括第一啟動子、目標基因、第一表達終止序列、第二啟動子、潛在的百草枯抗性基因、和第二表達終止序列。

2.權利要求1所述的表達盒，其中潛在的百草枯抗性基因是百草枯抗性基因，優選是pqrK2，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

3.權利要求1所述的表達盒，其中目標基因是非綠顏色辨識基因，優選是熒光蛋白編碼基因，更優選是紅色熒光蛋白編碼基因，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示。

4.權利要求1所述的表達盒，其中目標基因是非百草枯抗性的抗性基因，優選是草丁膦抗性，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：5所示。

5.一種用于植物轉化的載體，其中包含權利要求1-4至任一所述的表達盒，優選其中不含有潮霉素抗性基因。

6.權利要求5所述的載體，其是pCAMKT1300-Asred或pCAMKT1300-bar。

7.一種規模化篩選百草枯抗性的轉基因植物的方法，其包括，使用包含權利要求3所述的表達盒的用于植物轉化的載體通過農桿菌介導轉化植物愈傷組織或植物體，將該植物愈傷組織或植物體培養于含有百草枯的環境中，然后挑選生長呈現非綠色的植物愈傷組織或植物體，其中，所述植物愈傷組織或植物體本身呈現綠色，優選所述環境中的百草枯是用噴灑或涂抹百草枯的方式引入環境的。

8.一種規模化篩選百草枯抗性和非百草枯抗性的轉基因植物的方法，其包括，使用包含權利要求4所述的表達盒的用于植物轉化的載體通過農桿菌介導轉化植物愈傷組織或植物體，將所述植物愈傷組織或植物體培養于含有百草枯的環境中，然后挑選生長的植物愈傷組織或植物體，其中，優選所述環境中的百草枯是用噴灑或涂抹百草枯的方式引入環境的。

9.權利要求7或8的方法，其中，所述植物是雙子葉植物或單子葉植物，其中雙子葉植物優選是大豆、擬南芥、棉花或油菜，其中單子葉植物優選是水稻、小麥、玉米、高粱或谷子，優選所述植物是水稻。

10.權利要求7或8的方法，其中所述環境中百草枯的濃度為0.2～20uM，優選為1～5uM，最優選為1uM；和/或，培養植物愈傷組織或植物體的培養基是用于植物愈傷組織培養的培養基，優選不是用于植物分化和生根階段的培養基，優選用于植物分化和生根階段的培養基不含百草枯。