[發明專利]腫瘤細胞代謝放射性氣體的收集方法

無效

• 申請號: 201010530658.5
• 申請日: 2010-11-04
• 公開（公告）號: CN102466809A
• 公開（公告）日: 2012-05-23
• 發明（設計）人: 張昊文;劉芬菊;劉建軍;武書;蔣昕;徐媛媛
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: G01T7/02
• 分類號: G01T7/02;G01T1/167
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種氣體的收集方法，尤其涉及一種腫瘤細胞代謝放射性氣體的收集方法。?

背景技術

現有的腫瘤細胞代謝放射性氣體的收集方法是在一個密閉的環境中收集細胞代謝產生的放射性二氧化碳。?

底部液體為細胞培養液，細胞在瓶底貼壁生長。瓶底中間的柱子，為一支持物，作用是支撐上面的圓柱形的管子，管子內加上二氧化碳的收集液體氫氧化季胺，瓶子的側臂內加入H₂SO₄。整個體系用橡膠蓋密封。?

具體來說其過程如下：?

1、預先在培養瓶側壁中加入0.3ml?6N?H₂SO₄，用橡膠蓋密封整個體系；?

2、用醫用注射器通過橡膠蓋，向瓶底加入細胞和細胞培養液5ml，進行培養，其中，細胞培養液中含有放射性的葡萄糖，可以使細胞通過有氧化而生成放射性的二氧化碳；?

3、培養一段時間后，終止反應。通過注射，向圓柱形管子內加入氫氧化季胺0.5ml，同時將側臂內的硫酸倒入細胞培養的部位，使硫酸殺死細胞，并充分釋放出放射性的二氧化碳；?

4、將整個體系放置在震蕩器上，在37℃的條件下震蕩3小時；?

5、將收集有放射性二氧化碳的氫氧化季胺抽出來，加入閃爍瓶中，與閃爍液混勻，測量放射性二氧化碳的放射性計數。?

但是這樣采用的儀器體積大，計數也不精確，無法適應不同的精確測?量需求。?

發明內容

本發明的目的就是為了解決現有技術中存在的上述問題，提供一種腫瘤細胞代謝放射性氣體的收集方法。?

本發明的目的通過以下技術方案來實現：?

腫瘤細胞代謝放射性氣體的收集方法，其包括以下步驟：步驟①，將1.0～3.0×10⁶HCT116細胞接種至培養瓶中，培養至細胞貼壁。步驟②，移除原有培養基，加入2～3ml的完全培養基和100μL的放射性培養基，并對培養瓶進行密封；所述的放射性培養基中含有¹⁴C-葡萄糖。步驟③，加入2～3ml氫氧化海胺于閃爍瓶，將閃爍瓶瓶口密封。步驟④，通過真空采血針組件分別連接培養瓶及閃爍瓶，放入37℃培養箱中培養15分鐘至3小時。步驟⑤，培養結束時，用醫用注射器向培養瓶中一次性注入H₂SO₄，終止細胞代謝反應，將備用細胞計數。步驟⑥，注射完畢后，令注射器活塞退至平衡位置，將整個裝置在30～40℃下恒溫靜置12～24小時。步驟⑦，向閃爍瓶內注入5～10mL閃爍液，并將閃爍瓶內的液體混勻至澄清，避光若干小時后，放入計數儀內，測量每分¹⁴C放射性計數，測定¹⁴CO₂的含量。?

上述的腫瘤細胞代謝放射性氣體的收集方法，其中：步驟②所述的¹⁴C-葡萄糖的添加量為0.1～2μCi。?

進一步地，上述的腫瘤細胞代謝放射性氣體的收集方法，其中：步驟②所述的完全培養基添加量為2ml。?

更進一步地，上述的腫瘤細胞代謝放射性氣體的收集方法，其中：步驟②與步驟③所述的密封分別為用翻口乳膠塞和封口膜密封培養瓶瓶口；用翻口乳膠塞和封口膜密封閃爍瓶瓶口。?

更進一步地，上述的腫瘤細胞代謝放射性氣體的收集方法，其中：步驟④所述的真空采血針組件是兩端帶有針尖的聯通導管，其兩端的針尖分?別連接培養瓶及閃爍瓶。?

再進一步地，上述的腫瘤細胞代謝放射性氣體的收集方法，其中：所述的計數儀為Quantulus?1220低本底液體閃爍計數儀。?

本發明技術方案的優點主要體現在：本發明在實施過程中所采用到的設備體積小，有利于實施中的搬運、滅菌。并且，本發明的實施步驟相對簡單，便于操作，值得推廣。?

本發明的目的、優點和特點，將通過下面優選實施例的非限制性說明進行解釋。這些實施例僅是應用本發明技術方案的典型范例，凡采取等同替換或者等效變換而形成的技術方案，均落在本發明要求保護的范圍之內。?

具體實施方式