[發(fā)明專(zhuān)利]高效率轉(zhuǎn)基因棉花表達(dá)載體與應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010521702.6
• 申請(qǐng)日: 2010-10-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101962658A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 齊俊生;鞏志忠;陳智忠;王妍卿;羅祖勇;張定朋
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/82
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種植物表達(dá)載體，包括表達(dá)tfdA基因的表達(dá)盒；所述表達(dá)盒由依次連接的CaMV35S啟動(dòng)子、tfdA基因和終止子組成；所述tfdA基因的核苷酸序列為序列表中序列2，所述CaMV35S啟動(dòng)子的核苷酸序列為序列表中序列1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物表達(dá)載體，其特征在于：所述植物表達(dá)載體中還包括Flag標(biāo)簽，所述Flag標(biāo)簽的核苷酸序列為序列表中序列3。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的植物表達(dá)載體，其特征在于：所述植物表達(dá)載體的基礎(chǔ)構(gòu)架載體為pCAMBIA1300。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述的植物表達(dá)載體，其特征在于：所述植物表達(dá)載體按照下述方法構(gòu)建：

1)將CaMV35S啟動(dòng)子連接于tfdA基因的5′端獲得的片段插入到pCAMBIA1300的BstXI和XhoI酶切位點(diǎn)之間，獲得重組載體A；

2)將序列表中序列3所述的Flag標(biāo)簽片段插入重組載體A的多克隆位點(diǎn)，獲得所述植物表達(dá)載體。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的植物表達(dá)載體，其特征在于：所述步驟1)中，所述pCAMBIA1300中驅(qū)動(dòng)目的基因表達(dá)的啟動(dòng)子替換為super強(qiáng)啟動(dòng)子，所述super強(qiáng)啟動(dòng)子的核苷酸序列為序列表中序列5。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的植物表達(dá)載體，其特征在于：所述步驟1)中，所述pCAMBIA1300的多克隆位點(diǎn)的酶切位點(diǎn)改造為SalI、KpnI、BamI、SpeI、SalI、ApaI、SmaI、SwaI、PstI、HindIII、XbaI及AccIII。

7.根據(jù)權(quán)利要求4或5或6所述的植物表達(dá)載體，其特征在于：所述步驟2)中，所述的Flag標(biāo)簽片段先用XbaI和HindIII雙酶切后，回收Flag標(biāo)簽片段，插入重組載體A的XbaI和HindIII之間。

8.權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)所述的植物表達(dá)載體在培育轉(zhuǎn)基因棉花中的應(yīng)用。