[發明專利]基于單分子力譜的抗癌藥物鑒定方法

有效

• 申請號: 201010521638.1
• 申請日: 2010-10-21
• 公開（公告）號: CN101975854A
• 公開（公告）日: 2011-02-16
• 發明（設計）人: 方曉紅;徐永春;楊勇;師曉麗;梁偉
• 申請（專利權）人: 中國科學院化學研究所
• 主分類號: G01N33/566
• 分類號: G01N33/566;G01L5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種抗癌藥物的鑒定方法，包括如下步驟：

1)將靶標膜蛋白受體的配體修飾在原子力顯微鏡的針尖上，得到修飾后的針尖；

2)將離體的癌癥細胞進行孵育，孵育完畢后將步驟1)所得修飾后的針尖和孵育后的所述離體的癌癥細胞均置于原子力顯微鏡的樣品池中，測定所述離體的癌癥細胞中所述靶標膜蛋白受體與所述靶標膜蛋白受體的配體之間的結合力，得到所述離體的癌癥細胞中所述靶標膜蛋白受體與所述靶標膜蛋白受體的配體之間的結合幾率A；所述離體的癌癥細胞為含有所述靶標膜蛋白受體的癌癥細胞；

3)將所述離體的癌癥細胞和待鑒定物質進行孵育，孵育完畢后將其與所述步驟1)所得修飾后的針尖均置于原子力顯微鏡的樣品池中，測定孵育后的所述離體的癌癥細胞中所述靶標膜蛋白受體與所述靶標膜蛋白受體的配體之間的結合力，得到所述孵育后的所述離體的癌癥細胞中所述靶標膜蛋白受體與所述靶標膜蛋白受體的配體之間的結合幾率B；所述離體的癌癥細胞為含有所述靶標膜蛋白受體的癌癥細胞；

4)如果所述結合幾率B小于所述結合幾率A，則所述待鑒定物質為候選的抗癌藥物。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟1)修飾步驟包括如下步驟：

a)將所述原子力顯微鏡的針尖置于3-巰丙基三乙氧基硅烷的甲苯溶液中反應，反應完畢后得到硅烷化的針尖；

b)將所述步驟a)所得硅烷化的針尖置于ω-氮羥基琥珀酰亞胺酯多聚乙二醇α-馬來酰亞胺的二甲基亞砜溶液中進行反應，反應完畢得到活化后的針尖；

c)將所述步驟b)得到的活化后的針尖與所述靶標膜蛋白受體的配體于溶劑中進行反應，得到所述修飾后的針尖。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述步驟a)反應步驟中，溫度為18-25℃，優選20℃，時間為1.5-2小時，優選2小時；所述3-巰丙基三乙氧基硅烷的甲苯溶液的體積百分濃度為1％；

所述步驟b)反應步驟中，溫度為18-25℃，優選20℃，時間為2.5-3小時，優選3小時；所述ω-氮羥基琥珀酰亞胺酯多聚乙二醇α-馬來酰亞胺的二甲基亞砜溶液的濃度為1mg/ml；

所述步驟c)反應步驟中，溫度為18-25℃，優選20℃，時間為0.5-1小時，優選0.5小時；所述溶劑選自PBS緩沖液和Tris-HCl緩沖液中的至少一種；其中，所述PBS緩沖液的pH值為7.2-7.6，優選7.4，摩爾濃度為0.01M，所述Tris-HCl緩沖液的pH值為7.2-7.6，優選7.4，濃度為0.05M。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于：在所述步驟a)之后，所述步驟b)之前，所述抗癌藥物的鑒定方法還包括如下步驟：將所述硅烷化的針尖依次用甲苯、丙酮和乙醇洗滌，氮氣吹干；

在所述步驟b)之后，所述步驟c)之前，所述抗癌藥物的鑒定方法還包括如下步驟：將所述活化后的針尖用二甲基亞砜進行洗滌，再氮氣吹干；

在所述步驟c)之后，所述步驟2)之前，所述抗癌藥物的鑒定方法還包括如下步驟：用緩沖溶液洗滌所述修飾后的針尖；所述緩沖溶液選自PBS緩沖液和Tris-HCl緩沖液中的至少一種，優選PBS緩沖液；所述緩沖溶液的pH值為7.2-7.4，優選7.2。

5.根據權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述步驟2)和步驟3)孵育所述離體的癌癥細胞步驟中，溫度均為37℃，時間均為18-30小時，優選均為24小時。

6.根據權利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述步驟3)孵育待鑒定物質步驟中，溫度為37℃，時間為0.5-2小時，優選為1小時。

7.根據權利要求1-6任一所述的方法，其特征在于：所述靶標膜蛋白受體的配體為TGFβ1，所述離體的癌癥細胞為Hela細胞。

8.根據權利要求1-7任一所述的方法，其特征在于：所述步驟4)中，所述候選的抗癌藥物為能夠抑制所述癌癥細胞中所述靶標膜蛋白受體與所述配體結合的抗癌藥物；所述結合幾率A與所述結合幾率B之差不小于5％。

9.根據權利要求1-8任一所述的方法，其特征在于：所述步驟1)中，構成所述原子力顯微鏡的針尖的材料為氮化硅。