[發明專利]HIV-gag基因遺傳密碼子優化及艾滋病疫苗的制備方法與應用無效
| 申請號： | 201010521568.X | 申請日： | 2010-10-27 |
| 公開（公告）號： | CN102453722A | 公開（公告）日： | 2012-05-16 |
| 發明（設計）人： | 黃文林;王清濤;張輝;陳玉海;高詩娟 | 申請（專利權）人： | 中國科學院微生物研究所 |
| 主分類號： | C12N15/49 | 分類號： | C12N15/49;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N15/66;A61K48/00;A61K39/39;A61P31/18 |
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| 地址： | 100101 北京市朝陽區北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | hiv gag 基因 遺傳 密碼子 優化 艾滋病 疫苗 制備 方法 應用 | ||
1.序列表中序列2自13至1515位核苷酸所示的DNA分子。
2.含有權利要求1所述DNA分子的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。
3.如權利要求2所述的重組載體，其特征在于：所述重組載體為在pShuttle的多克隆位點插入權利要求1所述DNA分子得到的重組質粒；所述重組載體優選為在質粒pShuttle的Xba?I和Not?I酶切位點之間插入權利要求1所述DNA分子得到的重組質粒pShuttle-gag。
4.如權利要求2所述的重組載體，其特征在于：所述重組載體為重組質粒p2Φc31-gag；所述p2Φc31-gag的構建方法如下：
(1)用限制性內切酶Spe?I和EcoR?I雙酶切權利要求3所述的重組質粒pshuttle-gag，回收2.5kb的片段；
(2)用限制性內切酶Spe?I和EcoRI雙酶切質粒pBS-T，回收3.0kb的片段；
(3)將步驟(1)回收的片段和步驟(2)回收的片段連接，得到重組質粒pBS-T-gag；
(4)用限制性內切酶SpeI和Xho?I雙酶切重組質粒pBS-T-gag，回收2.5kb的片段；
(5)用限制性內切酶SpeI和Xho?I雙酶切質粒p2Φc31，回收11kb的片段；
(6)將步驟(4)回收的片段和步驟(5)回收的片段連接，得到重組質粒p2Φc31-gag。
5.如權利要求4所述的重組載體，其特征在于：所述重組質粒p2Φc31-gag的核苷酸序列如序列表的序列4所示。
6.如權利要求2所述的重組載體，其特征在于：所述重組載體為將重組菌用阿拉伯糖進行誘導得到的重組質粒minicircle-gag；所述重組菌是將權利要求4或5所述重組質粒p2Φc31-gag導入宿主菌得到的；所述宿主菌優選為大腸桿菌TOP10；用于進行所述誘導的阿拉伯糖的終濃度優選為1.5％(質量百分含量)。
7.如權利要求6所述的重組載體，其特征在于：所述重組質粒minicircle-gag的核苷酸序列如序列表的序列4自5’末端第4319至6915位核苷酸所示。
8.如下物質中的至少一種在制備艾滋病疫苗中的應用：權利要求1所述DNA分子，權利要求2至7中任一所述重組載體，權利要求2所述表達盒，權利要求2所述轉基因細胞系和權利要求2所述重組菌。
9.如下物質中的至少一種在制備體液免疫增強劑和/或細胞免疫增強劑中的應用：權利要求1所述DNA分子，權利要求2至7中任一所述重組載體，權利要求2所述表達盒，權利要求2所述轉基因細胞系和權利要求2所述重組菌。
10.體液免疫增強劑和/或細胞免疫增強劑和/或艾滋病疫苗，包括如下物質中的至少一種：權利要求1所述DNA分子，權利要求2至7中任一所述重組載體，權利要求2所述表達盒，權利要求2所述轉基因細胞系和權利要求2所述重組菌。
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