[發明專利]一種水產品中主要過敏原的快速免疫磁珠層析方法

有效

• 申請號: 201010521189.0
• 申請日: 2010-10-27
• 公開（公告）號: CN102043055A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: 盧瑛;王錫昌;鄭誠;石良
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所 31251
• 代理人: 王法男

技術領域

本發明涉及食物過敏原的檢測方法，特別是涉及一種檢測水產品中主要過敏原的免疫磁珠層析方法，該方法主要是使用甲殼類和貝類的主要過敏原原肌球蛋白（Tropomyosin，簡稱Tm）、魚類主要過敏原小清蛋白（Parvalbumin，簡稱Pa）的免疫磁珠層析檢測方法。

背景技術

食物過敏是由食物引起的機體對免疫系統的異常反應，近幾十年來，世界范圍內食物過敏反應癥患者呈現逐年上升趨勢，據WHO報道，到2010年，全球可能有40％到50％的人患有過敏癥，食物過敏現已成為一個新興的食品安全問題。食物過敏原為食物中引發或激起過敏反應的物質，通常是在特定食物中含有的含量豐富、天然存在的蛋白質。根據過敏原反應的速度、機制及臨床特點將致敏機制分為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型，其中大部分食物過敏是由IgE介導的I型超敏反應，一般癥狀包括嘔吐、腹痛、腹瀉等，也包括皮膚反應及呼吸道癥狀，嚴重情況下甚至會出現過敏性休克或死亡，目前尚無有效的治療方法。為了保護易感者健康，部分國家和地區對食物過敏原的標簽標注進行了嚴格規定并列入了立法范圍。

魚類和甲殼類水產品及其制品是聯合國糧農組織公認的兩類易引起食物過敏的主要致敏食物。據調查，在我國15～24歲年齡段人群中，約6％的人有過食物過敏的經歷，在我國青少年過敏人群中對魚類等海產品過敏的約占3-6％，位居其它致敏食物的首位。水產品的主要過敏原可分為兩大類，一為貝類及蝦蟹等甲殼類動物中的原肌球蛋白（Tropomyosin），另外一種則是鱈魚等魚類中的小清蛋白（Parvalbumin）。由于食物成分的復雜性，加之食品加工過程中使用各種配料和添加劑，傳統的化學分析很難滿足食物過敏原的檢測要求，因此，食物過敏原的快速檢測技術研究一直是國內外科學家的研究熱點。

目前，食物過敏原的檢測技術以分析全蛋白或酶解后肽段氨基酸序列的質譜技術、檢測編碼過敏原DNA片段的聚合酶鏈式反應（Polymerase?Chain?Reaction，PCR）技術及分析過敏原性的免疫學檢測技術為代表。

質譜技術能精確測定全蛋白或酶解后肽段的氨基酸序列，再根據相應數據庫來確定致敏蛋白，但是質譜技術存在著費時、所用儀器昂貴、檢測費用相對較高等缺點。

PCR方法則在檢測過程中易因操作不當受到污染而產生假陽性結果，存在操作要求技術性強、不能反映食物的真正過敏性即人們攝入該食物后會產生過敏反應等缺陷。

食物過敏原的免疫學檢測技術有酶聯免疫吸附法（ELISA）、生物傳感器法和免疫層析法。其中ELISA法是目前技術較為成熟的方法，市場上已有杏仁、大豆、花生、甲殼類、芝麻、芥末、羽扇豆、牛奶等食物過敏原的ELISA檢測試劑盒，這些試劑盒可在30～60min中內實現定性或半定量檢測，但是存在假陽性和假陰性反應。此外，公開號CN101285840A專利申請公開了一種食品中過敏原的固相免疫檢測方法，采用可拆式酶標板作為檢測載體，利用雙抗夾心模式，直接在過敏原特異性單抗上標記酶，再通過底物顯色反應來實現檢測。該方法檢測原理同ELISA法，與雙抗夾心ELISA的唯一區別是不需要使用酶標二抗。因此雖然具有多樣本同時檢測優點，但也存在著假陰性或假陽性反應，檢測結果易于受到外界因素的影響（如食品基質，食品的加工程度等）等缺點。

生物傳感器法是根據待測物質和分子識別元件特異性結合，發生生物化學反應，產生的生物學信息通過信號轉換器轉化為可以定量處理的電、光等信息，再經儀表放大和輸出，從而達到分析和檢測的目的。目前，微型SPR生物檢測器已應用于食品生產過程中花生過敏原的檢測，該檢測器可實現在線定量檢測。但是生物傳感器法需要特定的設備和配件，檢測成本高，對硬件設施要求極高。食品工業界需要的是快速、簡便、高效、特異性強且成本低廉的檢測方法，上述這些方法皆無法滿足食品工業界的需求。

免疫層析技術是ELISA技術原理的擴展應用，一般使用乳膠顆粒、膠體硒、膠體金以及脂質體等作為著色標記物。在層析時，標記物與待測物之間形成的復合物可被相應的配體所捕獲而聚集于硝化纖維膜上的檢測線并呈現出標記物所帶有的顏色，因此可以通過纖維膜上顯色條的有無、顏色深淺和反射光線等從而實現檢測目的，具有操作簡便、快速的優點。在目前公開的報道中，大都以膠體金作為指示劑，因此又被稱為膠體金檢測法。已公開文獻中涉及了一種檢測水產品食物過敏的免疫膠體金層析方法，可以實現過敏原的定性檢測，但是難以進行定量檢測，而且目視檢測使檢測結果不易記錄和保存。