[發明專利]一種水產品中主要過敏原的快速免疫磁珠層析方法

有效

• 申請號: 201010521189.0
• 申請日: 2010-10-27
• 公開（公告）號: CN102043055A
• 公開（公告）日: 2011-05-04
• 發明（設計）人: 盧瑛;王錫昌;鄭誠;石良
• 申請（專利權）人: 上海海洋大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531
• 代理公司: 上海碩力知識產權代理事務所 31251
• 代理人: 王法男

1.一種水產品中主要過敏原的快速免疫磁珠層析方法，其特征在于：采用雜交瘤技術制備篩選的、分別能與食用甲殼類水生生物和食用軟體水生生物Tm過敏原有特異性反應的鼠系單克隆抗體，和能對魚類的小清蛋白和青蛙、大鼠、海龜脊椎動物的Pa具有特異性反應性的鼠系單克隆抗體作為特異性抗體，并通過化學結合方式將鼠系單克隆抗偶聯到磁性納米材料的表面作為標記物，制作成適用于磁珠層析法的特異性納米檢測探針；而后在過敏原的磁性免疫層析試紙條的樣品墊上加入過敏原特異性納米檢測探針和樣品液，室溫下放置20min后，因抗原-抗體間特異性反應形成的免疫復合物經層析作用被檢測帶和控制帶所捕獲，形成肉眼可見的有色條帶，實現免疫層析；最后將測試卡放入磁信號檢測儀上，對免疫層析后形成的檢測帶和控制帶進行檢測以獲取生物學反應信號，然后繪制待檢樣本的標準曲線，依據標線求出待測樣品的過敏原含量，進行比對后得到最終免疫層析結果。

2.如權利要求1所述的一種水產品中主要過敏原的快速免疫磁珠層析方法，其特征在于：所述特異性納米檢測探針的制備方法為：

A、吸取適量羧基磁珠于離心管中，用500μL?0.01M含0.5%?Tween-20，pH為5.0的?MEST溶液作為活化緩沖溶液清洗磁珠，將離心管置于磁分離架上使得磁珠與與活化溶液分離，重復清洗幾次，最后重懸磁珠；

B、然后加入新鮮配制的2.6M碳化二亞胺和2.2M?N-羥基琥珀酰亞胺加入磁珠懸液中活化羧基30min，再用MEST緩沖液洗滌磁珠；隨后再用0.005M硼酸鹽吐溫溶液作為偶聯緩沖液洗滌磁珠2遍；

C、隨后加入小清蛋白單克隆抗體，在旋轉混合器上反應3小時;

D、然后用1%(w/v)BSA溶液對免疫磁珠表面沒有完全反應的活化基團進行封閉，并且通過BSA的物理吸附，封閉其它的空間位點，以降低在以后試驗中可能發生的非特異性吸附，室溫下封閉反應30min；所述BSA溶液事先溶解在BST緩沖液中；

E、最后用BST洗滌封閉后的免疫磁珠4次，棄去洗滌液，將磁珠重懸在保存液中。

3.如權利要求1所述的一種水產品中主要過敏原的快速免疫磁珠層析方

法，其特征在于：所述的所述的食用甲殼類水生生物是指：蝦類、蟹類和牡蠣，所述的食用軟體水生生物是指海螺、屬于腹足綱的鮑魚、屬于頭足綱的魷魚、章魚，以及雙殼貝類蛤蜊。

4.如權利要求1所述的一種水產品中主要過敏原的快速免疫磁珠層析方法，其特征在于：所述的磁性納米材料為表面修飾有羧基的超順磁性磁性納米顆粒，粒徑為50~300nm。