[發明專利]一種快速檢測西布曲明及其衍生物的膠體金層析試紙條及制備方法

無效

• 申請號: 201010516363.2
• 申請日: 2010-10-22
• 公開（公告）號: CN101980021A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 歐衛軍;吳迪宏
• 申請（專利權）人: 南通市伊士生物技術有限責任公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/554;G01N33/531
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 顧伯興

技術領域

本發明涉及一種快速檢測西布曲明及其衍生物的膠體金層析試紙條及制備方法，屬于生物學免疫方法的檢測技術領域。

背景技術

西布曲明是一種中樞神經作用減肥藥，具有興奮、抑食等作用，它有可能引起血壓升高、心率加快、厭食、失眠、肝功能異常等危害嚴重的副作用。因為其價格低廉，且確有一定的抑食減肥功效，屢被一些不法生產企業非法添加入減肥保健品中，牟取暴利。據調查，市面上銷售的98%的減肥產品中均添入了這種成分。西布曲明會增加服用者患心臟病及中風的風險，其說明書中也明確列出了高血壓控制不理想患者，以及有冠心病、心衰、心律失常和中風的患者屬于禁忌服藥范疇，如消費者在不知情的情況下服用了含有該成分的減肥保健食品，有可能產生嚴重的后果，所以，為了保證人民群眾的飲食用藥安全，我們必須加大力度打擊非法添加現象。然而近年來，不法分子非法產生的手段日趨隱蔽，且西布曲明檢測方法較復雜，需要精密的分析儀器和專業技術人員，因而造成監管部門監督抽驗成本很大，收效卻不甚理想。如申請號為200910030401.1的一篇專利：一種快速檢測西布曲明的膠體金層析試紙條及制備方法，制備方法采用浸泡工藝，時間長，需要2-3小時，干燥慢，該膠體金層析檢測試紙條以膠體金標記的多克隆抗體為基礎制備而成，親和力低，特異性弱，易引起交叉。

發明內容

本發明的目的是為了克服以上的不足，提供一種能快速、靈敏、簡便地檢測西布曲明及其衍生物的膠體金層析試紙條及制備方法。

本發明是通過以下技術方案來實現：一種快速檢測西布曲明及其衍生物的膠體金層析試紙條，用于檢測西布曲明及其衍生物，包括襯板，襯板的一端設有樣品墊，襯板的另一端設有吸水墊，襯板的中間設有包被膜，樣品墊與包被膜之間設有金標結合墊，金標結合墊為吸附西布曲明及其衍生物的金標抗體的聚酯纖維氈，在包被膜上有用西布曲明及其衍生物偶聯的載體蛋白溶液包被直線式檢測線T線，和用羊抗鼠IgG溶液包被直線式對照線C線，兩條線豎向平行排列。襯板為不吸水的PCV韌性材料。包被膜為硝酸纖維素膜，或混合纖維素膜。吸水墊為植物纖維棉紙。西布曲明及其衍生物的金標抗體為膠體金標記的抗西布曲明及其衍生物單克隆抗體復合物，偶聯西布曲明及其衍生物的載體蛋白為牛血清白蛋白BSA。

一種快速檢測西布曲明及其衍生物的膠體金層析試紙條的制備方法，制備偶聯西布曲明及其衍生物的載體蛋白，用于制備相應的檢測線T線；制備偶聯西布曲明及其衍生物的載體雞卵清白蛋白，用于制備單克隆抗體，制備西布曲明及其衍生物金標抗體，用于制備吸附西布曲明及其衍生物金標抗體的聚酯纖維氈；制備羊抗鼠IgG抗體，用于制備對照線C線，包括如下步驟：

（A）將西布曲明及其衍生物與載體牛血清白蛋白BSA/雞卵清白蛋白OVA進行偶聯制備人工合成抗原；

a、生成水溶性碳化二亞胺（EDC）：往反應瓶中加入干燥的二甲基甲酰胺（DMF）及那非類原料或拉非類原料，并通N₂保護，在室溫下進行攪拌，待二甲基甲酰胺（DMF）完全溶解后，快速稱取濃度為?60%的氫化鈉（NaH），并將其加入所述反應瓶中，攪拌50-70分鐘，直至溶液無氣泡產生，然后用注射器吸取溴乙酸乙酯慢慢注入所述反應瓶中，注入完畢后，在室溫下攪拌11-13小時，之后將反應液傾入水中分散，以氯仿進行提取，合并提取液，以無水Na₂SO₄進行干燥，之后過濾，再經過減壓濃縮后得到固體，加入無水乙醚打漿洗滌所述固體，之后進行過濾，最后真空干燥得到新的固體，此固體為烷基化物；將無水乙醇和上述步驟所得的烷基化物加入新的反應瓶中，進行攪拌分散，再加入NaOH溶液，加熱回流反應2小時，停止加熱稍冷卻后，將反應液轉入單口瓶中，減壓濃縮得糊狀物，再加入水，以鹽酸調節至pH值為7-9的液體，以氯仿進行提取，合并提取液，再用飽和食鹽水洗一次，以無水Na₂SO₄干燥，過濾，減壓濃縮得白色固體，用甲醇重結晶，得白色粉狀固體，此固體為水溶性碳化二亞胺（EDC）；