[發明專利]水產品中氨芐青霉素和阿莫西林殘留量的高效液相色譜熒光檢測法

無效

• 申請號: 201010516301.1
• 申請日: 2010-10-22
• 公開（公告）號: CN101980012A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 王萍亞;周勇;黃鸝;薛超波;許鎮堅
• 申請（專利權）人: 舟山市質量技術監督檢測院
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 舟山固浚專利事務所 33106
• 代理人: 周震海

技術領域

????本發明涉及的是水產品中氨芐青霉素和阿莫西林殘留量的高效液相色譜熒光檢測方法，屬于食品安全檢測領域。

背景技術

????氨芐青霉素和阿莫西林藥物的檢測方法有薄層色譜法、毛細管電泳法、化學發光法、液相色譜法和色譜聯用技術。薄層色譜法，毛細管電泳法，化學發光法，方法簡便，不需昂貴的儀器，但檢出限不高。高效液相色譜紫外檢測法法穩定性高，重現性好，但是由于多數青霉素化合物在紫外區沒有特征吸收光譜，一般在200~235nm有吸收，但該波長范圍內的選擇性較差。色譜聯用技術存在設備昂貴，對檢測人員要求高，分析費時等問題。樣品中青霉素藥物殘留量為ug/L數量級，背景干擾嚴重，迄今尚未見對水產品中氨芐青霉素和阿莫西林殘留量既經濟又正確的檢測方法的報道，因而有加以研究的必要。

發明內容

????本發明提出水產品中氨芐青霉素和阿莫西林殘留量的一種檢測方法是高效液相色譜熒光檢測法具體按下列步驟操作：

1.制備標準液???購買氨芐青霉素標準品，含氨芐青霉素(C₁₆H₁₈N₃NaO₄S)不少于96.5%；阿莫西林標準品,含阿莫西林(C₁₆H₁₉N₃O₅S)不少于98.5%。

制備混合標準儲備溶液：準確稱取氨芐青霉素10.0mg、阿莫西林10.0mg加水溶解并稀釋至濃度均為1.0mg/ml的儲備液,本溶液于0℃～4℃保存，一周內有效。

?制備混合標準中間溶液：準確移取混合標準儲備溶液100μL，用水定容至100mL，配成每升含氨芐青霉素1.0mg、阿莫西林1.0mg的混合標準中間溶液。

????制備混合標準工作溶液：以混合標準中間溶液配制氨芐青霉素標準使用濃度系列：0.1、1.0、5.0、20.0、50.0μg/L；以混合標準中間溶液配制阿莫西林標準使用濃度系列：1.0、5.0、20.0、50.0、100.0μg/L。此標準工作液臨用時現配。

???2.抽樣???本發明提供的檢測方法，從原始樣品中任意抽取樣品，經高速組織搗碎機搗碎。四分法縮分出不少于500g樣品，混勻，均分成兩份。裝入清潔容器，加封，標明標記。-18℃以下冷凍保存。

3.提取???稱取5g樣品（精確至0.01g）置于50mL聚丙烯離心管中，加入1.68g磷酸二氫鈉，加適量水溶解，定容至500mL制備成提取液30mL，以10000r/min均質3min，再于室溫下以3000?r/min離心10min，上清液移入離心管中，殘留物用20mL提取液同上法均質、離心所得二次上清液，合并二次上清液于離心管中，加入濃度為750?mg/ml三氯乙酸0.5mL，振搖5min，3000?r/min離心10min，上清液做備用液。

4.凈化???固相萃取小柱預先依次用5mL甲醇、5mL蒸餾水、加入濃度為200?mg/ml三氯乙酸5mL潤洗，將備用液過柱，控制速度在20滴/min，依次用濃度為200?mg/ml三氯乙酸5mL和蒸餾水洗滌，真空抽干，再用5mL乙腈洗脫，真空抽干,收集洗脫液于離心管中。

5.衍生???洗脫液在40℃下氮氣吹干，加0.5mL水溶解或準確量取0.5mL的標準工作液加入濃度為200?mg/ml三氯乙酸0.1mL和7%甲醛溶液0.1mL,旋渦混勻20s，密封，置于沸水浴中加熱30?min。取出,冷卻至室溫,用20%乙腈水溶液定容至1mL。

6.過濾???經0.45μm微孔濾膜過濾，供液相色譜測定。

7.測定???色譜測定條件為

色譜柱：C18柱，粒度5μm，4.6mm（id）×150mm，或性能相當者。

檢測器：熒光檢測器，Ex=380nm，Em=465nm。

流速：1.0mL/min。

進樣量：50μL。

柱溫：40℃。

流動相：磷酸鹽緩沖溶液（稱取磷酸二氫鉀2.72g，用水溶解，再用85%的濃磷酸調pH至3.5±0.05,加水稀釋至刻度,搖勻即得）－乙腈?(75+25，v/v)。

本發明提供的檢測方法，通過衍生技術，在熒光檢測器條件下，可以很大程度上提高檢測靈敏度。且檢出限小于5ug/kg。解決了薄層色譜法，毛細管電泳法，化學發光法等方法檢出限高，以及紫外檢測器條件下背景干擾嚴重的問題，并且與質譜相比，分析成本較低。

具體實施方式