[發(fā)明專利]用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010515916.2
• 申請(qǐng)日: 2010-10-22
• 公開（公告）號(hào): CN101991867A
• 公開（公告）日: 2011-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王吉耀;李聰;嚴(yán)蕙蕙
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院;復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K49/12
• 分類號(hào): A61K49/12;A61K49/06;C07K7/06
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針及其制備方法，用于用磁共振、光學(xué)等多模式無創(chuàng)性顯像整合素αvβ3受體來評(píng)估肝纖維化。

背景技術(shù)

迄今，肝活檢仍是評(píng)估肝纖維化的唯一“金標(biāo)準(zhǔn)”。然而，肝活檢是有創(chuàng)的，可引起致命的并發(fā)癥，因此不能被患者普遍接受，這造成了很大一部分慢性肝病患者在診斷和治療上的延誤；同時(shí)，在無明顯癥狀的患者中，很難重復(fù)進(jìn)行肝活檢，這就無法準(zhǔn)確地隨訪慢性肝病患者病情的變化；此外，樣本取樣誤差和病理觀察的不一致性都影響了肝活檢的準(zhǔn)確性。因此，需要一種精確的無創(chuàng)傷性的方法來診斷和評(píng)估肝纖維化。目前，肝纖維化無創(chuàng)傷性的評(píng)估方法有：1纖維化血清標(biāo)記物。器官特異性差，易受炎癥和機(jī)體代謝的干擾，標(biāo)準(zhǔn)化困難，組合指標(biāo)更多反映炎癥，對(duì)纖維化分期較困難；2生化指標(biāo)。需多項(xiàng)組合(如Fibrotest)。由于肝臟極強(qiáng)的儲(chǔ)備功能，只在嚴(yán)重肝纖維化時(shí)改變明顯，并且生化指標(biāo)影響因素多，解釋困難，不同病因、不同時(shí)期的肝纖維化評(píng)估的準(zhǔn)確性不同；3常規(guī)影像。目前常規(guī)B超、CT、MRI難于反映肝纖維化早期改變，評(píng)估多限于肝硬化及并發(fā)癥；4發(fā)展中的影像技術(shù)。近年推出超聲檢測(cè)低頻彈性波的瞬時(shí)彈性記錄儀(Fibroscan)和運(yùn)用MRI彌散加權(quán)成像(DWI)、³¹磷波譜成像(³¹MRS)及彈性成像變化等新技術(shù)，通過測(cè)量肝組織硬度和彈性來評(píng)估肝臟纖維化程度，優(yōu)于其他的無創(chuàng)的方法，具有一定的應(yīng)用前景。然而，近來的研究發(fā)現(xiàn)也存在一定的局限性，如腹壁脂肪的含量在很大程度上影響Fibroscan等對(duì)肝纖維化的檢測(cè)準(zhǔn)確性，并且這些方法在對(duì)早期肝纖維化的診斷上也存在困難。

目前診斷和評(píng)估肝纖維化的方法都未能較好反映慢性肝損傷修復(fù)過程中活化細(xì)胞表型和數(shù)量變化等分子病理改變，并在可靠性、敏感性、可操作性等方面存在不一致性，尚難達(dá)到臨床對(duì)肝纖維化早期診斷和治療效果實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)評(píng)估的要求。不能對(duì)肝纖維化做出正確評(píng)估一直以來是制約基礎(chǔ)研究走向臨床的“瓶頸”，也是不能開發(fā)抗纖維化藥物與臨床試驗(yàn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(arginine-glycine-asparagic?acid，RGD)系列是整合素結(jié)合配基的最常見識(shí)別位點(diǎn)。整合素α_vβ₃能識(shí)別ECM中特異構(gòu)象的RGD配體。人工合成含RGD肽鏈高通量篩選發(fā)現(xiàn)，精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸-(右旋)酪氨酸-賴氨酸(RGDyK)、精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸-(右旋)苯丙氨酸-賴氨酸(RGDfK)等五肽分子也能和整合素α_vβ₃受體特異結(jié)合，對(duì)五肽中賴氨酸側(cè)鏈上活性氨基進(jìn)行小分子修飾并不會(huì)顯著影響受體與配基結(jié)合活性。

在本發(fā)明的前期的研究中，發(fā)現(xiàn)活化HSCs中整合素α_vβ₃表達(dá)明顯上調(diào)，cRGDyK多肽在肝纖維化的診斷中可以做為一種潛在的靶點(diǎn)。這部分結(jié)果已經(jīng)發(fā)表SCI文章：Biochemicalcharacterization?of?the?binding?of?cyclic?RGDyK?to?hepatic?stellate?cells.Xiao-weiHuang，Ji-Yao?Wang，et?al.Biochemical?Pharmacology.2010，80：136-143.(IF＝4.8，2008)另外，本發(fā)明也發(fā)現(xiàn)在硫代乙酰胺(thioacetamide，TAA)和膽總管結(jié)扎(bile?ductligation，BDL)誘導(dǎo)的兩種大鼠肝纖維化模型中，整合素α_vβ₃和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth?muscle?actin，SMA)表達(dá)在程度和部位上密切相關(guān)，它和肝纖維化的發(fā)展趨勢(shì)是一致的。并已經(jīng)進(jìn)行了SPECT和超聲顯像的初步體內(nèi)研究。

目前，國(guó)外已有不少通過以RGD環(huán)肽標(biāo)記的對(duì)比劑對(duì)整合素α_vβ₃受體表達(dá)進(jìn)行顯像的分子影像學(xué)研究。主要工作集中在腫瘤新生血管、血管損傷重塑、破骨細(xì)胞參與的骨重建等方面。國(guó)外靶向于整合素α_vβ₃受體，對(duì)腫瘤相關(guān)血管新生進(jìn)行的MRI磁共振分子成像研究也已經(jīng)有一定基礎(chǔ)，相對(duì)比較成熟。而在肝纖維化中，目前未見相關(guān)的研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種納米探針及其制備方法，用于肝纖維化的診斷和評(píng)估。