[發(fā)明專(zhuān)利]用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201010515916.2
• 申請(qǐng)日: 2010-10-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101991867A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王吉耀;李聰;嚴(yán)蕙蕙
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院;復(fù)旦大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): A61K49/12
• 分類(lèi)號(hào): A61K49/12;A61K49/06;C07K7/06
• 代理公司: 上海申匯專(zhuān)利代理有限公司 31001
• 代理人: 翁若瑩

1.一種用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針，其特征在于，包括載體，所述載體連接熒光基團(tuán)和磁共振造影基團(tuán)，并經(jīng)由橋連基團(tuán)連接能夠與肝纖維化/肝硬化中肝星狀細(xì)胞表面上的受體相結(jié)合的靶向化合物基團(tuán)。

2.如權(quán)利要求1所述的用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針，其特征在于，所述的載體為2-8代的PAMAM樹(shù)枝狀高分子。

3.如權(quán)利要求1所述的用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針，其特征在于，所述的熒光基團(tuán)為羰花青類(lèi)近紅外熒光染料基團(tuán)以及非近紅外熒光染料基團(tuán)中的至少一種。

4.如權(quán)利要求3所述的用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針，其特征在于，所述的羰花青類(lèi)近紅外熒光染料基團(tuán)為IR783基團(tuán)或Cy5.5基團(tuán)。

5.如權(quán)利要求3所述的用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針，其特征在于，所述的非近紅外熒光染料基團(tuán)為羅丹明基團(tuán)。

6.如權(quán)利要求1所述的用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針，其特征在于，所述的磁共振造影基團(tuán)為釓配合物Gd-DOTA基團(tuán)。

7.如權(quán)利要求1所述的用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針，其特征在于，所述靶向化合物基團(tuán)為c(RGDyK)基團(tuán)。

8.如權(quán)利要求7所述的用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針，其特征在于，所述c(RGDyK)的制備方法為：

第一步：將0.4重量份的取代度為0.6mmol/g的樹(shù)脂-Gly用二氯甲烷沖洗并溶脹，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌；

第二步：用20vol％哌啶脫保護(hù)，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌；將Fmoc-Arg(Pbf)-OH與1-羥基苯并三唑混合，用苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽和N，N-二異丙基乙胺溶解，其中，F(xiàn)moc-Arg(Pbf)-OH、1-羥基苯并三唑、苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽以及N，N-二異丙基乙胺與樹(shù)脂-Gly的比例分別為：1.2mmol-1.3mmol∶0.4g，0.15g-0.2g∶0.4g，2.4ml-2.5ml∶0.4g，0.4ml-0.5ml∶0.4g；將所得溶液加入到第一步的樹(shù)脂中，恒溫振蕩器上反應(yīng)45分鐘，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌，進(jìn)行茚三酮檢測(cè)確定是否反應(yīng)完全；

第三步：將Fmoc-Arg(Pbf)-OH依次替換為Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-D-Tyr(tBu)-OH和Fmoc-Asp(otBu)-OH，重復(fù)進(jìn)行第二步，得到連接在樹(shù)脂上的整條被保護(hù)線(xiàn)狀肽鏈H-Asp(otBu)-D-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-Arg(Pbf)-Gly(2-Cl-Trt)-OH；用20vol％哌啶脫保護(hù)，分別用N，N-二甲基甲酰胺和二氯甲烷沖洗，用二氯甲烷和三氟乙酸的混合液切割，切割液抽吸入裝有吡啶和甲醇的燒瓶中，最后用甲醇沖洗樹(shù)脂，沖洗液也抽吸入燒瓶中，旋蒸去除二氯甲烷和甲醇，用N，N-二甲基甲酰胺溶解，再用蒸餾水沉淀出絮狀粗品，用砂芯漏斗過(guò)濾得沉淀，用乙腈溶解，旋蒸去乙腈，加入蒸餾水，超聲分散沉淀，冷凍干燥得到粗品；

第四步：將第三步所得的粗品0.19-0.2重量份溶解于N，N-二甲基甲酰胺，加入二氯甲烷，加入N，N-二異丙基乙胺0.019-0.02重量份以及六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷0.06-0.07重量份進(jìn)行環(huán)化，常溫下攪拌3～4小時(shí)，旋蒸去除二氯甲烷，加蒸餾水沉淀出多肽，用砂芯漏斗過(guò)濾得沉淀，用乙腈溶解，旋蒸去乙腈，加入蒸餾水，超聲分散沉淀，冷凍干燥；用三氟乙酸和蒸餾水的混合物脫保護(hù)，常溫下磁力攪拌3～4小時(shí)，用冰乙醚沉淀，砂芯漏斗過(guò)濾得沉淀，用蒸餾水溶解，制備型HPLC純化、冷凍干燥得到c(RGDyK)。

9.如權(quán)利要求1所述的用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針，其特征在于，所述橋連基團(tuán)為聚乙二醇基團(tuán)。

10.權(quán)利要求1所述用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針的制備方法，其特征在于，具體步驟為：

第一步：將靶向化合物溶于N，N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺，加入溶于N，N-二甲基甲酰胺的馬來(lái)酰亞胺-橋連基團(tuán)-N-羥基琥珀酰亞胺酯，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)得到與橋連基團(tuán)相連的靶向化合物，加入溶于磷酸鹽緩沖液的載體，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)，用水稀釋?zhuān)梅肿恿?0000Da截?cái)嗟碾x心式過(guò)濾器用純水進(jìn)行超濾、純化，去除水溶性的小分子副產(chǎn)物，冷凍干燥得到與靶向基團(tuán)相連的載體；

第二步：將第一步中所得的與靶向基團(tuán)相連的載體溶于4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中，加入DOTA-N-羥基琥珀酰亞胺酯，邊加邊攪拌，整個(gè)過(guò)程中加入氫氧化鈉溶液使溶液pH值控制在8.4-8.6，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)，用水稀釋?zhuān)梅肿恿?0000Da截?cái)嗟碾x心式過(guò)濾器超濾、純化，去除沒(méi)有結(jié)合的DOTA-N-羥基琥珀酰亞胺酯，冷凍干燥后溶于4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中，加入碳酸釓，60℃下攪拌過(guò)夜，離心沉淀除去多余的碳酸釓，用水稀釋?zhuān)梅肿恿?0000Da截?cái)嗟碾x心式過(guò)濾器超濾、純化，冷凍干燥得到與靶向基團(tuán)和磁共振造影基團(tuán)相連的載體；

第三步：將熒光基團(tuán)-N-羥基琥珀酰亞胺酯溶解在N，N-二甲基甲酰胺中，將第二步得到的與靶向基團(tuán)和磁共振造影基團(tuán)相連的載體溶于4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液中，滴加上述熒光基團(tuán)-N-羥基琥珀酰亞胺酯溶液，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)，用水稀釋?zhuān)梅肿恿?0000Da截?cái)嗟碾x心式過(guò)濾器超濾、純化，得到與熒光基團(tuán)、磁共振造影基團(tuán)和靶向基團(tuán)相連的載體，即為用于早期肝纖維化診斷的多模式靶向探針。