[發明專利]一種制備偽狂犬病病毒的方法

有效

• 申請號: 201010513449.X
• 申請日: 2010-10-15
• 公開（公告）號: CN101979518A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 張許科;孫進忠;喬榮岑
• 申請（專利權）人: 洛陽普萊柯生物工程有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N7/02
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

1.一種偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)細胞的接種：將哺乳動物細胞接種到潮汐式生物反應器載體罐(8)內添加的載體(9)上，進行細胞的吸附培養；

2)在細胞的吸附培養結束后進行細胞的擴增培養；

3)將偽狂犬病毒接種到擴增培養的細胞上，進行病毒的吸附培養；

4)在病毒的吸附培養結束后進行感染細胞的培養；和

5)收獲含有偽狂犬病毒的培養液，

其中步驟1)至4)中的培養在潮汐培養條件下進行，所述潮汐培養條件是通過泵出或泵入載體罐(8)中的培養液以間歇性淹沒與暴露載體實現的。

2.根據權利要求1所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述載體罐(8)與裝有培養液的培養液袋(6)以能夠將培養液袋內的培養液泵入載體罐中和能將載體罐內的培養液泵入培養液袋中的方式相聯通。

3.根據權利要求1所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述載體罐中的載體由選自聚丙烯、藻素酸、聚酯纖維、明膠、聚酰胺、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚氨酯、碳氟聚合物以及陶瓷中的一種或多種制成。

4.根據權利要求1所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述載體罐中的載體占載體罐容積的40％～100％(V/V)。

5.根據權利要求1～4任一項所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述的潮汐式生物反應器載體罐容積為2～100L。

6.根據權利要求1～4任一項所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述偽狂犬病毒是選自偽狂犬病病毒強毒株、偽狂犬病病毒基因缺失株和偽狂犬病病毒弱毒株中的一種。

7.根據權利要求6所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述的偽狂犬病病毒為選自偽狂犬病病毒強毒株Fa株、Ea株、偽狂犬病病毒基因缺失株Fa(TK^-/gE^-/gI^-)株、Ea(TK^-/gE^-/gI^-)株、偽狂犬病病毒弱毒株Bartha株、Bartha-K61株、Bucharest株、BUK株中的一種。

8.根據權利要求7所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述的偽狂犬病病毒為選自偽狂犬病毒基因缺失株Fa(TK^-/gE^-/gI^-)株、Bartha-K61株和BUK株中的一種。

9.根據權利要求7或8所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，在步驟3)中的病毒接種按照感染復數為0.0001～1進行。

10.根據權利要求9所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述哺乳動物細胞為選自Vero細胞、BHK-21細胞、MDBK細胞、ST細胞、PK15細胞和IBRS細胞中的一種。

11.根據權利要求10所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，所述哺乳動物細胞為選自Vero細胞、BHK-21細胞和MDBK細胞中的一種。

12.根據權利要求10或11所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，在步驟1)中以8.5×10⁶～4.0×10⁷cells/g載體的細胞密度接種細胞。

13.根據權利要求12所述的偽狂犬病病毒的大規模生產方法，其特征在于，在步驟2)中的細胞擴增培養達到5.5×10⁸～7.5×10⁸cells/g載體的細胞密度時進行步驟3)所述的病毒接種。