[發明專利]一種檢測PCA3基因、PSA基因的液相芯片法及其診斷試劑盒

有效

• 申請號: 201010509924.6
• 申請日: 2010-10-15
• 公開（公告）號: CN101942523A
• 公開（公告）日: 2011-01-12
• 發明（設計）人: 邵棠
• 申請（專利權）人: 邵棠
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 王函

1.一種檢測PCA3基因、PSA基因的液相芯片法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)設計一種羧基微球Beads，該微球上共價結合針對PCA3基因或PSA基因的mRNA所設計的特異性核酸探針；或者設計包含兩種不同熒光編碼的羧基微球Beads，每種微球上分別共價結合針對PCA3基因和PSA基因的mRNA所設計的特異性核酸探針；

(2)針對PCA3基因和/或PSA基因的mRNA，分別設計上下游引物，通過逆轉錄PCR擴增出相應的產物；

(3)含有特異性核酸探針的微球與PCA3基因和/或PSA基因的mRNA的逆轉錄擴增產物混合雜交，加入鏈霉親和素-藻紅蛋白Streptavidin-PE后，通過液相芯片xMAP方法檢測熒光信號；

(4)將檢測到的熒光信號與內參基因的熒光信號進行比較，從而確定檢測樣品中是否存在前列腺疾病相關的基因PCA3基因和/或PSA基因，及其在樣品中的表達狀況，同時亦可計算出PCA3基因/PSA基因的比值。

2.如權利要求1所述的檢測PCA3基因、PSA基因的液相芯片法，其特征在于，步驟(1)中，所述的微球是平均直徑為5.6μm，結合了不同熒光染料的聚苯烯微球，即色彩編碼微球Color-coded?beads。

3.如權利要求1所述的檢測PCA3基因、PSA基因的液相芯片法，其特征在于，步驟(1)中，所述的共價結合于微球上的針對PCA3基因的mRNA、PSA基因的mRNA所設計的特異性核酸探針，包括如下序列，其中5’端含氨基修飾：

針對PCA3基因的mRNA：

探針(1)：5’-AminolinkerC12?ATTTCTCACCTCTGTATCATC-3’，如SEQ?ID?NO.1所示；

探針(2)、(3)、(5)、(6)同探針(1)，如SEQ?ID?NO.1所示；

探針(4)：5’-AminolinkerC12?CTCACCTCTGTATCATCAG-3’，如SEQ?ID?NO.2所示；

探針(7)：5’-AminolinkerC12?ATCTCTGTGCTTCCTTTTGT-3’，如SEQ?ID?NO.3所示；

探針(8)同探針(7)，如SEQ?ID?NO.3所示；

探針(9)：5’-AminolinkerC12?CAAATCTGTAATCCCGTTCA-3’，如SEQ?ID?NO.4所示；

探針(10)：5’-AminolinkerC12?TATGTGTCAAGAGGAGAGCC-3’，如SEQ?ID?NO.5所示；

或者包含有上述序列或其互補序列的向5’端或/和3’端延長的序列；

或者與上述序列或其互補序列的同源性大于85％的序列；

或者與上述序列的堿基互補序列；

或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合；

針對PSA基因的mRNA：

探針A：5’-AminolinkerC12?CAGAATCACCCGAGCAGGTG-3’，如SEQ?ID?NO.6所示；

探針B：5’-AminolinkerC12?GGGGTCAAGAACTCCTCTGG-3’，如SEQ?ID?NO.7所示；

探針C：5’-AminolinkerC12?CACGCTTTTGTTCCTGATGC-3’，如SEQ?ID?NO.8所示；

探針D同探針A，如SEQ?ID?NO.6所示；

探針E同探針B，如SEQ?ID?NO.7所示；

或者包含有上述序列或其互補序列的向5’端或/和3’端延長的序列；

或者與上述序列或其互補序列的同源性大于85％的序列；

或者與上述序列的堿基互補序列；

或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合。