[發明專利]一種養血清腦顆粒的HPLC指紋圖譜檢測方法

有效

• 申請號: 201010506121.5
• 申請日: 2010-10-14
• 公開（公告）號: CN102441057A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發明（設計）人: 高鈞;李文博;佟玲;倪倩
• 申請（專利權）人: 天津天士力制藥股份有限公司
• 主分類號: A61K36/804
• 分類號: A61K36/804;A61K9/16;G01N30/02;G01N30/36;A61P7/06;A61P1/16;A61P25/00;A61P1/08;A61P25/20;A61K35/56
• 代理公司: 北京華科聯合專利事務所 11130
• 代理人: 王為

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種養血清腦顆粒的HPLC指紋圖譜檢測方法。

背景技術

養血清腦顆粒是由當歸、川芎、白芍、鉤藤、雞血藤、熟地黃、決明子、夏枯草、細辛、延胡索和珍珠母11味中藥，采用現代化制劑工藝技術精制而成，具有養血平肝、活血通絡的作用，用于血虛肝亢所致的頭痛、眩暈眼花、心煩易怒、失眠多夢等癥，是受國家重點保護的中藥品種。

其中當歸和川芎中所共有的指標性成分阿魏酸，被研究證明具有舒張血管、升高血清白蛋白和防治脂質過氧化損傷等作用，被普遍用于防治偏頭痛、冠心病和糖尿病周圍神經病變等臨床多發癥；川芎，夏枯草和鉤藤中所共有的咖啡酸被證明具有阻遏腦內MDA含量增加和SOD活性降低的功能，被用于改善學習記憶能力障礙；夏枯草中的迷迭香酸和決明子中的黃芩苷，也被分別證明具有改善腎小球高濾過狀態，抑制細胞外基質增生和解除發熱，抗焦慮等作用，是養血清腦顆粒中的重要有效成分。

作為多維組分復雜樣品的整體性評價中藥質量的有效控制手段，中藥指紋圖譜是目前能夠為國內外廣泛接受的全面評價中藥質量模式的一種方法。美國FDA在植物藥制品指導原則中允許申報者提供產品的色譜指紋圖譜資料，德國藥用植物學會、英國草藥典、印度草藥典以及加拿大藥用及芳香植物學會也都把指紋圖譜作為質量控制標準的內容之一。目前有關于養血清腦顆粒指紋圖譜方面的研究在國內外尚未見報道，為了更好地控制其質量，保證臨床用藥的安全性和有效性，本實驗采用HPLC法對其指紋圖譜進行了初步研究，在方法學考察的基礎上建立了養血清腦顆粒的高效液相指紋圖譜，并考察制劑中共有峰在藥材中的歸屬，為其質量控制提供了更全面的信息。

發明內容

本發明提供一種養血清腦顆粒的HPLC指紋圖譜檢測方法，該方法經過以下步驟：

1)養血清腦顆粒供試品溶液的制備，精密稱定養血清腦顆粒用3∶1甲醇-水配制成溶液，作為制劑供試品溶液；

2)將步驟1得到的溶液注入高效液相色譜儀進行測定，分別得到它的色譜圖。

本發明所述的方法，其中所用的甲醇-水的體積比為3∶1，采用超聲提取。

本發明所述的方法，其中所述的檢測方法中，步驟2所述的液相色譜采用Agilent?Zorbax?C18柱。

本發明所述的方法，其中所述的檢測方法中，步驟2所述的液相色譜采用乙腈-0.5％甲酸做流動相。

本發明所述的方法，其中所述的檢測方法中，步驟2所述的液相色譜條件：

色譜柱：Agilent?Zorbax?C18(4.6mm×250mm，5μm)色譜柱；流動相：A(0.5％甲酸)-B(乙腈)，線性梯度洗脫：0～20min，B(5％～13％)；20～49min，B(13％～30％)；49～98min，B(30％～75％)；流速為1.0mL·min^-1；柱溫：40℃；檢測波長：0～32min為327nm，32～98min為280nm；進樣量：10μL；

本發明還提供了一種養血清腦顆粒的檢測方法，包括以下步驟：

(A)取合格的養血清腦顆粒產品，按照上述方法建立養血清腦顆粒標準指紋圖譜；

(B)取待檢養血清腦顆粒，按照上述方法得到指紋圖譜；

(C)將步驟(B)得到的指紋圖譜和步驟(A)得到的標準指紋圖譜進行比對，符合即為合格產品，不符合即為不合格產品。

本發明優選的測定方法包括采用以下儀器和藥品：Agilent1200高效液相色譜儀及Finnigan?TSQ?Quantum?Discovery液質聯用系統；Milli-Q超純水系統(法國Millipore公司)；甲醇、乙腈均為色譜純；對照品阿魏酸，咖啡酸，迷迭香酸和黃芩苷均購自中國藥品生物制品檢定所；養血清腦顆粒由天津天士力制藥股份有限公司提供。

本發明的檢測方法，其色譜條件經過方法學驗證，結果良好。

精密度試驗?取同一供試品溶液，連續進樣5次，分別對各共有峰的相對保留時間及峰面積的變化情況進行考察，結果各共有峰保留時間的RSD小于0.12％，相對峰面積的RSD小于2.11％，說明儀器的精密度較好，符合指紋圖譜分析的要求。

重復性試驗?取同一批樣品，制備5份制劑供試品溶液，分別進樣，以14號峰作為參考，考察共有峰的保留時間及相對峰面積，結果各共有峰相對保留時間的RSD小于0.27％，相對峰面積的RSD小于3.89％，說明實驗方法的重復性較好，符合指紋圖譜分析的要求。