[發明專利]一種利用溶氧參數控制畢赤酵母發酵生產抗菌肽的方法

有效

• 申請號: 201010505326.1
• 申請日: 2010-10-13
• 公開（公告）號: CN101979649A
• 公開（公告）日: 2011-02-23
• 發明（設計）人: 姜正軍;陳溥言;袁永;蘇曉明;朱孟豪;田建國;王希鳳;孫大明
• 申請（專利權）人: 山東華辰生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C12R1/84
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 趙會祥

1.一種利用溶氧參數控制畢赤酵母發酵抗菌肽的生產方法，其特征在于，步驟如下：

(1)向發酵罐中加入培養基，實消并冷卻后，調節發酵溫度為27～30℃，在通氣量為0.3～1.5vvm、攪拌速度為250～400rpm的條件下，標定溶氧的百分點，得到發酵培養基；

(2)將活化后的基因酵母菌株接種于發酵培養基中，接種量為10％(v/v)，同時標記為0點，開始發酵，發酵條件為：通氣量為0.3～1.5vvm、攪拌速度為100～400rpm、罐壓為0.02～0.1MPa；

(3)當DO值由10％以下上升至50％以上時，開始流加甲醇至DO值回落至10％～30％，停止流加甲醇，當DO值再次穩定升高至50％以上時，再次開始流加甲醇至DO值回落至10％～30％，停止流加甲醇，循環操作，通過流加甲醇、調節通風和轉速控制DO值始終維持在10％～30％；

(4)當流加甲醇后DO值不再回落時，發酵結束。

2.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，所述步驟(1)中的培養基為0.5％甲醇的BMMY培養基或1％甘油的BMGY培養基。

3.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，所述步驟(2)的活化，采用如下方法：

將基因工程酵母菌在含有博萊霉素抗性的YPDS液體培養基進行搖床活化，培養條件為28～30℃，100～200rpm，培養20～26小時，以OD₆₅₀不超過4為限度。

4.如權利要求3所述的生產方法，其特征在于，所述的含有博萊霉素抗性的YPDS液體培養基組分如下：

酵母浸粉10g/L、蛋白胨20g/L、葡萄糖20g/L、山梨糖醇1mol/L、博來霉素25ug/ml。

5.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，所述步驟(3)中流加甲醇的量為培養基中甲醇終濃度不超過0.2％(v/v)。

6.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，所述步驟(3)中循環操作的次數為3～6次。

7.如權利要求1所述的生產方法，其特征在于，所述步驟(3)中流加甲醇時DO值回落至大于30％時，通過降低攪拌轉速和/或降低通風量來調節DO值，但通風量不低于0.3vvm；DO值回落至小于10％時，通過提高攪拌轉速和/或提高通風量來調節DO值。