[發(fā)明專利]一種從芹菜籽中提取天然活性蛋白質(zhì)和多肽的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010502807.7
• 申請日: 2010-10-11
• 公開（公告）號: CN102020695A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 阿布力米提·伊力;馬慶苓;趙波;阿吉艾克拜爾·艾薩
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所
• 主分類號: C07K1/36
• 分類號: C07K1/36
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務(wù)所 65106
• 代理人: 張莉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種從芹菜籽中提取天然活性蛋白質(zhì)和多肽的方法。

背景技術(shù)

生物活性肽又稱天然肽(natural?peptide)，是生物體內(nèi)一些具有特殊功能肽的統(tǒng)稱，是源于蛋白質(zhì)的多功能化合物。生物活性肽不僅具有多種人體代謝和生理調(diào)節(jié)功能，還能為機(jī)體提供營養(yǎng)。特別是一些低肽不僅有比蛋白質(zhì)更好的消化吸收性能，還具有促進(jìn)免疫、調(diào)節(jié)激素、抗菌、抗病毒、降血壓和降血脂等生理功能，食用安全性極高，是當(dāng)前食品科技界最熱門的研究課題和極具發(fā)展前景的功能因子。因此，沒有肽，就沒有活性，也就沒有生命。

由于抗氧化多肽的分子小，所以直接從動植物組織中提取天然抗氧化多肽時，天然提取資源有限，工藝復(fù)雜，成本昂貴。如何提高生產(chǎn)效率、降低成本成為抗氧化多肽的問題。在國內(nèi)植物多肽類化合物的研究尚處于初始階段，研究范圍小，對于多肽類化合物的化學(xué)研究文獻(xiàn)很有限，而且使用的方法中植物多肽類化合物回收低，不適用于大規(guī)模制備，這很大程度上限制了抗氧化多肽類活性化合物的應(yīng)用和工業(yè)化生產(chǎn)。因此，尋找安全高效的抗氧化替代品就顯得十分重要。

植物中的生物活性蛋白質(zhì)和多肽經(jīng)常從植物種子中純化得到，雖然植物其它部位也能分離到植物種子一樣的具有生物活性蛋白質(zhì)和多肽，但含量很低，給分離純化工作以及應(yīng)用帶來很大的難度。植物種子作為儲存蛋白的重要部位，富集大量的具有活性的多種蛋白質(zhì)和多肽，因此植物種子常常被選為尋找新的生物活性多肽類化合物的研究對象。

芹菜“Apium?graveolens?L.”又名香芹、旱芹，是傘形科一年生或兩年生草本植物，喜肥沃土壤，全國和世界各地均有栽培。芹菜籽為傘形科植物旱芹的干燥成熟果實，已記載于《中華人民共和國衛(wèi)生部<藥品標(biāo)準(zhǔn)>維吾爾藥分冊》和《維吾爾藥志》等書籍，是新疆資源豐富的藥食兼用植物資源。維吾爾醫(yī)認(rèn)為芹菜籽能消除寒濕閉阻，消食健胃，消腫散氣，消石止痛，調(diào)和百藥，增強(qiáng)瀉藥的功能，振奮性欲。用于寒濕性大小關(guān)節(jié)痛疼，頸項疼痛，脅肋疼痛，體內(nèi)結(jié)石，嘔吐血痢，小便不通，月事不行，死胎不下以及內(nèi)臟寒濕性病變。維吾爾醫(yī)藥臨床表明，芹菜籽有散氣、消腫、利尿、開通阻滯、降血壓等功效，在維吾爾藥中主要用于治療高血壓病、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、氣滯性子宮炎、腹水、腎臟等疾病。

據(jù)大量文獻(xiàn)檢索可知，有關(guān)芹菜子蛋白質(zhì)、多肽等化合物的研究報道較少，曾有專利(其公開號為201010227463.3)報道過有關(guān)芹菜籽多肽的提取方法，其中的提取方法是利用常規(guī)攪拌提取；本發(fā)明在此基礎(chǔ)上對提取方法加以改進(jìn)，利用超聲提取芹菜籽中的蛋白質(zhì)和多肽，并以芹菜籽中的蛋白質(zhì)和多肽的提取量為考察指標(biāo)，并通過ABTS自由基清除法評價其抗氧化能力。利用超聲提取芹菜籽中的蛋白質(zhì)和多肽，不僅沒有改變蛋白質(zhì)和多肽的成分，還可以增加提取產(chǎn)量，而且還可以節(jié)約時間，進(jìn)而節(jié)約能源。為植物種子中生物活性多肽類化合物的有效提取以及植物資源的充分利用提供了科學(xué)依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于，提供一種從芹菜籽中提取天然活性蛋白質(zhì)和多肽的方法，該方法通過超聲提取、硫酸銨沉淀得到具有生物活性(如抗氧化活性)的蛋白質(zhì)和多肽，再通過常規(guī)方法確定提取的蛋白質(zhì)和多肽的成分及其分子量和確定蛋白質(zhì)和多肽的抗氧化活性。為維吾爾藥食兩用植物芹菜籽的生物活性物質(zhì)基礎(chǔ)研究，并開發(fā)相應(yīng)的產(chǎn)品提供了依據(jù)。該方法提取過程簡單，又不易使蛋白質(zhì)和多肽失活，制備的蛋白質(zhì)和多肽抗氧化活性高，無毒性、熱穩(wěn)定性好，易于擴(kuò)大規(guī)模生產(chǎn)，降低生產(chǎn)成本，是制備生物活性蛋白質(zhì)和多肽的理想方法之一。通過該方法獲得的蛋白質(zhì)和多肽作為制備食品、藥品以及化妝品添加劑的用途。

本發(fā)明所述的一種從芹菜籽中提取天然活性蛋白質(zhì)和多肽的方法，按下列步驟進(jìn)行：

a、將采用常規(guī)方法脫脂芹菜籽用液氮研磨，再用磷酸緩沖液在溫度4-50℃超聲提取，時間0.25-2.0小時，過濾，將濾液用低溫離心機(jī)除去沉淀，得到上清液備用；

b、將上清液加入無水硫酸氨，充分?jǐn)嚢枞芙夂蠓胖帽潇o置24小時，低溫離心，沉淀，將沉淀物采用透析脫鹽后，干燥得到芹菜籽活性蛋白質(zhì)和多肽；

c、再利用常規(guī)方法十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳確定提取的蛋白質(zhì)和多肽的成分及其分子量，并對提取的蛋白質(zhì)和多肽采用2，2’-聯(lián)氮-雙-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)自由基清除來確定蛋白質(zhì)和多肽的抗氧化活性。

步驟a、b中的提取、分離、純化過程所用水均為三蒸水。

步驟a、b中的低溫離心速度為12000轉(zhuǎn)/分，20min。