[發(fā)明專利]一種春蘭梅瓣品種的分子特異標記及其獲得方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201010502030.4
• 申請日: 2010-10-01
• 公開（公告）號: CN101955933A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄭琪;孫葉芳;趙虎;黃岳夫;林國梅;邢海
• 申請（專利權(quán)）人: 鄭琪;孫葉芳;趙虎;黃岳夫;林國梅;邢海
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 紹興市越興專利事務(wù)所 33220
• 代理人: 張謙

1.一種春蘭梅瓣品種的分子特異標記，其特征在于：采用特異性ISSR-PCR擴增引物對春蘭普通品種與梅瓣基因進行擴增，得到大小為550bp的DNA片段即為所述的分子特異標記。

2.如權(quán)利要求1所述的一種春蘭梅瓣品種的分子特異標記的獲得方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)春蘭梅瓣品種的資源收集和基因組DNA的提取；

(2)春蘭梅瓣品種的特異PCR擴增引物的獲得，采用ISSR-PCR技術(shù)，經(jīng)過大量的篩選試驗，獲得特異PCR擴增引物為ACACACACACACACACCTT；

(3)ISSR分子標記的PCR擴增產(chǎn)物的獲得：擴增總體積為20uL，10×PCR?buffer(含mg²⁺)2.0uL，10mmol/L?dNTP?0.4uL，2.5U/uLTaqDNA聚合酶0.3uL，10u?mol/L特異PCR擴增引物ACACACACACACACACCTT?2uL，基因組DNA?1uL，ddH₂O?14.3uL；PCR反應(yīng)條件：94℃3min；94℃45sec，51℃45sec，72℃90sec，38個循環(huán)；72℃7min；

(4)電泳檢測：取上述PCR擴增產(chǎn)物2uL，與1uL上樣緩沖液混勻，點樣于1％的瓊脂糖凝膠上，于1×TBE緩沖液中，8V/cm電壓下電泳，電泳結(jié)束后，用EB染色，然后在凝膠成像儀上照相，此時可見550bp大小的特異片段，而其他普通春蘭均未見特異性片段。

3.如權(quán)利要求2所述的一種春蘭梅瓣品種的分子特異標記的獲得方法，其特征在于：所述步驟(1)中，用改良的CTAB法提取基因組DNA，DNA稀釋至20ng/uL，-20℃冰箱貯藏備用。