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[發明專利]組織型纖溶酶原激活劑及其片段的親和肽及其用途無效

專利信息
申請號: 201010298683.5 申請日: 2010-09-30
公開(公告)號: CN101948509A 公開(公告)日: 2011-01-19
發明(設計)人: 吳韜;張錦;王琦 申請(專利權)人: 浙江大學
主分類號: C07K7/06 分類號: C07K7/06;C07K1/22;C12N9/50;G01N33/50
代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200 代理人: 陳昱彤
地址: 310027 浙*** 國省代碼: 浙江;33
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摘要:
搜索關鍵詞: 組織 型纖溶酶原 激活劑 及其 片段 親和 用途
【說明書】:

技術領域

發明公開了一種可用于分離純化組織型纖溶酶原激活劑及其片段的親和肽,屬于生物技術領域。

背景技術

組織型纖溶酶原激活劑是纖維蛋白溶解系統中與纖維蛋白溶解相關的一種重要的絲氨酸蛋白酶類。它能將纖溶酶原激活為纖維蛋白溶解酶,即纖溶酶,被激活的纖溶酶可催化溶解纖維蛋白,使血栓溶解。由于其特異性及內源性使它被廣泛用于急性血栓栓塞性疾病的臨床治療。目前,應用基因工程的方法已可獲得組織型纖溶酶原激活劑突變體(Val4-Cys261),研究如何獲得低價、安全的組織型纖溶酶原激活劑有良好的應用前景。

親和層析是利用生物分子間專一的親和力進行分離的一種層析方法。這種專一吸附能力是由于共價偶聯在惰性載體上的物質(配基)與待純化的物質間專一、可逆的親和力(包括靜電作用、氫鍵、疏水作用等)??捎门浠怯H和層析的核心部分。

用作親和層析配基分離純化組織型纖溶酶原激活劑的有苯甲脒及其衍生物,還有基于組織型纖溶酶原激活劑與纖溶蛋白酶原結合位點設計的肽配基。一些研究通過由三、四個氨基酸組成的小肽探索組織型纖溶酶原激活劑活性位點的親和性,已獲得肽配基如QDES。此外還有根據組織型纖溶酶原激活劑與纖維蛋白的特異性結合位點設計的肽配基,如GPRP,KKKK,KKKKGPRG;通過組織型纖溶酶原激活劑與纖溶酶原結合位點設計的配基,如KCPGRVRVVGGC等。相對于仿生親和配基,肽配基具有高效、安全等優點,即使配基不慎脫落,也不易造成機體中毒。我國的報道多涉及組織型纖溶酶原激活劑突變體研究,缺少分離純化組織型纖溶酶原激活劑的有效方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種組織型纖溶酶原激活劑及其片段的親和肽及其用途,可用于分離純化組織型纖溶酶原激活劑及其片段。

為實現上述目的,本發明所采取的技術方案是該組織型纖溶酶原激活劑及其片段的親和肽具有如下結構:

X1X2X3X4X5X6X7

其中,X1為丙氨酸或甘氨酸;X2為脯氨酸或蘇氨酸;X3、X4均為谷氨酸;X5為異亮氨酸、亮氨酸或纈氨酸;X6為甲硫氨酸;X7為天冬氨酸。

進一步地,本發明在所述X5和X6之間設有一個氨基酸殘基,所述氨基酸殘基為異亮氨酸、亮氨酸或纈氨酸。

進一步地,本發明所述X1X2X3X4X5X6X7的序列為選自SEQ?ID?Nos.1至12中的任一種。

進一步地,本發明所述氨基酸殘基的序列為選自SEQ?ID?Nos.13至46中的任一種。

進一步地,本發明用于分離純化或檢測組織型纖溶酶原激活劑或其片段。

進一步地,本發明通過將所述親和肽連接于固相支持物上以分離純化或檢測組織型纖溶酶原激活劑或其片段。

與現有技術相比,本發明的優點是:

(1)本發明的親和肽對組織型纖溶酶原激活劑及其片段具有較強的親和性,因此對組織型纖溶酶原激活劑及其片段有較好的分離純化效果。

(2)本發明的親和肽包含七至八個氨基酸殘基,屬于小肽,穩定性好,即使不慎脫落也不易引起機體免疫反應,有較好的安全性。

(3)本發明的親和肽與組織型纖溶酶原激活劑的作用位點為其37環上帶正電的殘基,因此本發明的親和肽也可與組織型纖溶酶原激活劑片段有特異性的相互作用,進而用于分離純化組織型纖溶酶原片段。

附圖說明

圖1為序列如SEQ?ID?No.1所示的親和肽與組織型纖溶酶原激活劑結合示意圖;

其中,1表示組織型纖溶酶原激活劑,2表示組織型纖溶酶原激活劑上與配基相吸附的殘基,3表示序列如SEQ?ID?No.1所示的親和肽。

具體實施方式

實施例1:組織型纖溶酶原激活劑及其片段親和肽配基的設計

本發明的親和肽采用分子動力學方法,是以組織型纖溶酶原激活劑與纖溶酶原激活物抑制劑作用位點為基礎設計的。

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