[發明專利]一種提高過氧化氫酶存儲穩定性的方法

有效

• 申請號: 201010297893.2
• 申請日: 2010-09-30
• 公開（公告）號: CN101955923A
• 公開（公告）日: 2011-01-26
• 發明（設計）人: 張峰;廖祥儒;曾化偉;張震宇
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96;C12N9/08;C12R1/43
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一、技術領域

本發明為一種提高過氧化氫酶存儲穩定性的方法，屬于酶制劑技術領域。

二、背景技術

過氧化氫是一種很強的氧化劑，一直以來應用于食品工業作為殺菌劑和半導體工業作為硅片的洗滌劑。近年來過氧化氫被用于工業廢水處理中，其中最常用于含硫、含酚和含氰化物廢水的處理，以及氣體的洗滌、脫氯等。2006年，過氧化氫全世界的消費量大約220萬噸。但過氧化氫在工業產品和排放物中的殘留可能會引起人的身體健康惡化和環境污染。過氧化氫酶(CAT)能有效地催化過氧化氫分解為無毒的水和氧氣，并且酶本身沒有害。另在處理工業廢水中，H₂O₂中添加CAT可以促進降解芳環化合物和脂族化合物，H₂O₂中添加CAT處理生物過濾器，還可提高其對廢水脫臭效果。因此極大的刺激了過氧化氫酶生產的研究。本申請人已經于2009年11月申請了《一株產過氧化氫酶的菌株及利用該菌株以檸檬酸為碳源發酵產酶的方法》的發明專利，申請公布號為CN?101805709A。該菌株(Serratia?marcescens?SYBC08)已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(保藏號為CGMCC3449)。由于液態過氧化氫酶在保存、運輸和銷售過程中易失活，因此提高它的穩定性是該酶工業化生產的應用基礎。

三、發明內容

本發明的目的是提供一種對胞內過氧化氫粗酶液存儲穩定性更為有效方法——添加復合穩定劑，其穩定效果明顯優于使用單一成分的穩定劑，且酶液在存儲的30d內還能提高酶的活力，增強酶的使用效果。

本發明的技術方案：以Serratia?marcescens?SYBC08(保藏號為CGMCC3449)為出發菌株，經過深層發酵、菌體破壁和離心后獲得了胞內過氧化氫酶液，其酶活力不低于20000U/ml(體積等同于發酵液體積)。在該酶液中同時添加一定濃度的NaCl(20-40mmol/L)和CaCl₂(20-40mmol/L)后，其穩定效果明顯高于單獨添加NaCl、CaCl₂、明膠、甘油的效果：酶液在30℃存儲的30d內，過氧化氫酶的活力得到提高，增強酶的使用效果；酶液在30℃存儲90d后，酶活保留率高達90％以上，顯著提高了酶的穩定性。

本發明的有益效果：本發明的方法對胞內過氧化氫粗酶液具有更為優越的存儲穩定性且成本較低。

具體實施方式

對照實施例

以Serratia?marcescens?SYBC08為出發菌株，經過深層發酵、菌體破碎和離心后得到的胞內過氧化氫粗酶液，在30℃不添加穩定劑的條件下放置30d和90d，酶活保留率分別為60.04％和40.63％。

實施例1

向上述胞內過氧化氫粗酶液中同時添加NaCl(30mmol/L)和CaCl₂(30mmol/L)，在30℃保存30d和90d，其酶活保留率分別為111.22％和92.57％。

實施例2

向上述胞內過氧化氫粗酶液中同時添加NaCl(40mmol/L)和CaCl₂(20mmol/L)，在30℃保存30d和90d，其酶活剩余率分別為102.59％和90.25％。

實施例3

向上述胞內過氧化氫胞內粗酶液中同時添加NaCl(20mmol/L)和CaCl₂(40mmol/L)，在30℃保存30d和90d，其酶活保留率分別為130.42％和90.12％。