[發明專利]基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體檢測方法

有效

• 申請號: 201010297200.X
• 申請日: 2010-09-28
• 公開（公告）號: CN102023214A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發明（設計）人: 王革非;李蕊;李康生
• 申請（專利權）人: 汕頭大學醫學院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;C12N15/44;C12N15/55;C12N15/85;C12N15/79
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

1.一種基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體的檢測方法，其特征在于所述方法是將流感病毒血凝素基因和神經氨酸酶基因克隆后轉染真核細胞，使真核細胞表面重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶蛋白，以此為凝集反應基質與待檢樣品中的流感病毒血凝素抗體和神經氨酸酶抗體結合，發生凝集反應，根據是否發生凝集反應來檢測待檢樣品中的流感病毒抗體。

2.根據權利要求1所述的基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體的檢測方法，其特征在于所述凝集反應基質為天然的重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞，或者是經過胰酶處理、機械分散、酶解分散、固定劑固定、穩定劑處理、防腐劑處理的方法同時或選擇性處理后的重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞。

3.根據權利要求1所述的基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體的檢測方法，其特征在于所述重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞為同時共同重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶，或者分別重組表達流感病毒血凝素的真核細胞與重組表達神經氨酸酶的真核細胞的混合。

4.根據權利要求1所述的基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體的檢測方法，其特征在于所述真核細胞表面重組表達的流感病毒血凝素和神經氨酸酶蛋白為完整全長的流感病毒血凝素和神經氨酸酶蛋白，或流感病毒血凝素蛋白和神經氨酸酶的一部分，或流感病毒血凝素和神經氨酸酶的抗原表位，或將流感病毒血凝素和神經氨酸酶蛋白全長或部分肽段中的部分氨基酸進行突變或修飾，或者是流感病毒血凝素和神經氨酸酶蛋白與其它蛋白、多肽、肽段進行融合表達或共同獨立表達。

5.根據權利要求1所述的基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體的檢測方法，其特征在于所述重組表達為瞬時表達或穩定表達。

6.根據權利要求1所述的基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體的檢測方法，其特征在于所述真核細胞表面重組表達的血凝素為甲型流感病毒的H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16亞型、乙型流感病毒或丙型流感病毒的血凝素。

7.根據權利要求1所述的基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體的檢測方法，其特征在于所述真核細胞表面重組表達的神經氨酸酶蛋白為甲型流感病毒的N1、N2、N3、N4、N5、N6、N7、N8、N9亞型、乙型流感病毒或丙型流感病毒的神經氨酸酶。

8.根據權利要求1所述的基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體的檢測方法，其特征在于所述流感病毒血凝素抗體和神經氨酸酶抗體為IgG、IgM、IgA、IgE、IgD中的一種或幾種的混合物。

9.根據權利要求1所述的基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體的檢測方法，其特征在于所述真核細胞為酵母、哺乳動物細胞、昆蟲細胞或其它真核細胞，重組表達的流感病毒血凝素位于細胞膜或細胞壁表面。

10.根據權利要求1～9中任意一條權利要求所述的基于重組表達流感病毒血凝素和神經氨酸酶的真核細胞凝集反應的流感病毒抗體的檢測方法，其特征在于所述真核細胞表面表達的流感病毒血凝素和神經氨酸酶的比例為1∶19～19∶1。