[發明專利]一種新型的選擇標記及其在植物遺傳轉化中的應用

無效

• 申請號: 201010296258.2
• 申請日: 2010-09-29
• 公開（公告）號: CN102021166A
• 公開（公告）日: 2011-04-20
• 發明（設計）人: 李海燕;范秀朵;陳靜;王南
• 申請（專利權）人: 吉林農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/10;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 長春市四環專利事務所 22103
• 代理人: 張鐵生

1.一種安全選擇標記，筒稱：DP-P5CS，它是由干旱誘導型啟動子DP和抗旱基因P5CS組成。

2.根據權利要求1所述的一種安全選擇標記，其特征在于：所述的干旱誘導型啟動子DP，其堿基序列如：SEQ?ID?No.2所示，它來源于耐鹽堿大豆HJ-1，抗旱基因P5CS其堿基序列如：SEQ?ID?No.1所示。

3.一種安全選擇標記的制備方法，它包括：

1)人工合成：

引物1：CGCCGAGCTCGAACTAATGCTTAACCATGCC

引物2：CTACAAGGATCTGTGTTCTCCATATTCTGACCAAACAGACTGTG

引物3：ACACAGTCTGTTTGGTCAGAATATGGAGAACACAGATCCTTGTAG

引物4：CCGCTCGAGTCATATAGAAAGGTCTCTGTGAGTG

2)提取的大豆HJ-1基因組DNA作為模板，利用引物1和引物2，擴增干旱誘導型啟動子DP片段；

3)利用Hoagland基礎培養液水培法水培耐鹽堿大豆HJ-1，當大豆幼苗長出第一片真葉時，用2％PEG脅迫處理48h收集根和葉，以TIANGEN?RNAprep?pure?Plant?Kit提取RNA反轉錄成的cDNA作為模板，利用引物3和引物4，將基因cDNA擴增出來，得抗旱基因GmP5CS片段；

4)利用引物2和引物3，以步驟2)、3)的PCR產物為模板，進行融合片段DP-P5CS的全長擴增。

4.一種安全選擇標記植物表達載體，是植物表達載體中插入了一種安全選擇標記DP-P5CS。

5.根據權利要求4所述的一種安全選擇標記植物表達載體，其特征在于：所述的表達載體為pCAMBIA1301。

6.一種植物轉基因的方法，包括：

1)將目的基因插入載體pCAMBIA1301-DP-P5CS中；所述的目的基因，包括：抗病基因、品質改良基因、抗蟲基因等；

2)利用農桿菌介導的植物表達載體轉化植物，產生一種安全選擇標記轉化植株；

3)檢測轉化植株，獲得含有目的基因和抗旱基因的轉基因植株；

4)種植轉化植株自交后代株系，并培育具有安全標記的轉基因植株。